183019. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 5-andraösztén-17-on származékok előállítására
1 183 019 2 4. példa a) Az lb) példában leírt körülmények között 25 g 30-metoxi-5-kolesztént emulgeálunk. b) Az 1c) példa körülményei között 100 ml Mycobacterium spec. NRRL-B-3805 tenyészetet állítunk elő, a tenyészetet 24 óráig inkubáljuk, hozzáadunk 7 ml 3-metoxi-5-koIesztén szuszpenziót (megfelel 0,25 g 3- metoxi-5-koleszténnek) és további 96 óráig fermentáljuk. A fermentációs keveréket az le) példában leírtak szerint feldolgozva 110 mg 141 — 142 °C-on olvadó 30- metoxi-5-androszten-17-ont kapunk. 5. példa a) 25 g 4-koleszten-3-ont a 2a) példában leírt körülmények között reagáltaturik, de glikol helyett 2,2-dimetil-propándiolt használunk. Feldolgozás után 17,3 g 144—145 °c olvadáspontú 3,3-(2',2'-dimetil-propiléndioxi)-5-kolesztént kapunk. 0,5 g 3,3-(2-2'-dimetil-propilén-dioxi)-5-kolesztént 60 °C-on 15 ml dimetil-formamidban oldunk. b) Az lb) példában leírt körülmények között 100 ml Mycobacterium spec. NRRL-B-3805 kultúrát állítunk elő és 24 óráig inkubáljuk. Ezután a tenyészethez 0,15 ml 3,3-(2',2’-dimetil-propilén-dioxi)-5-kolesztén oldatot adunk és további 96 óráig fermentálunk. A fermentációs keveréket az le) példában leírtak szerint feldolgozzuk és 0,01 g 3,3-(2-2'-dimetil-propilén-dioxi)-5-kolesztén mellett 0,03 g 200-201 °C-on olvadó 3,3-(2',2'-dimetilpropilén-dioxi)-5-androsztén-l 7-ont kapunk. 6 6. példa a) Az la) példában leírt módon 500 ml Mycobacterium spec. NRRL-5-3683 előtenyészetet készítünk. b) Az le) példa szerinti tápoldat 100 mi ét beoltjuk 10 ml előtenyészettel és 24 óráig inkubáljuk. Utána az lb) példa szerint előállított 30-etoxi-5-kolesztén szuszpenzió 1,4 mi ét (megfelel 0,05 g 30-etoxi-5-koleszténnek) adjuk a kultúrához, további 96 óráig fermentáljuk, a fermentációs keveréket az le) példában leírtak szerint feldolgozzuk és 0,005 g 3-etoxi-5-kolesztén mellett 0,025 g 147 °C olvadáspontú 30-etoxi-5-androszten-17-ont kapunk. 7. példa a) Az la) példában leírt körülmények között 750 ml-es Erlenmeyer-lombikban 200 ml Mycobacterium spec. NRRL-B-3805-tenyészetet készítünk 29 °C-on. b) 1,23 % élesztőkivonatból (65 %-os), 0,68 % káliumdihidrogén-foszfátból és 0,2% Tween® 80-ból álló, pH 6,0-ra beállított 40 liter steril tápoldatot tartalmazó 50 literes fermentort beoltunk 200 ml Mycobacterium spec, kultúrával és az előtenyészetet 29 °C-on levegőztetés közben (2 m3 pro óra) 48 óráig inkubáljuk. c) 200 g 30-et$xj-5-|cplesztéfit §§ g Teginnel és nátrium-hidroxid-oldattal pH 11,3-ra beállított 6 lít£f vízzel 95 °C-on Dispax® Reaktor D-3-6-6 készületjei 4 (Jahnke és Kunkel cég, NSZK) 30 percig emulgeálunk. Az emulziót 20 percig 1 20 °C-on csírátlanítjuk. d) A 11b) példában leírt összetételű, de pH 6,5-re beállított steril tápoldat 40 literét tartalmazó 50 literes 5 fermentort beoltunk 2 liter Mycobacterium spec, előtenyészettel és levegőztetés (1 m3 pro óra) és keverés (220 fordulat pro perc) közben 24 óráig 29 °C-on inkubáljuk.Utána a tenyészethez hozzáadjuk alle) példa szerint 10 előállított 30-etoxi-5-kolesztén emulziót és további 92 óráig fermentálunk. Fermentálás után a tenyészetet 3X5 liter etilén-kloriddal extraháljuk, az etilén-klorid kivonatot szűrjük és vákuumban bepároljuk. 15 A maradékot (148 g) szilikagéloszlopon kromatografáljuk, etil-acetátból átkristályosítjuk és 83,5 g 145-146,5 C olvadáspontú 30-etoxi-5-androszten-17-ont kapunk. Az 5-androszten-17-on-származékok kémiai feldolgo- 20 zását a következő kiviteli példák kapcsán ismertetjük: 25 8. példa a) 1,5 g 3-(2',2-dimetil-propilén-dioxi)-5-androszten- 17-ont 75 ml metanolban és 10 ml díklór-metánban oldunk és az oldathoz keverés közben, 2 óra alatt 1,5 g nátrium-bór-hidridet adunk. A reakciókeveréket még 30 1 óráig keverjük, jeges vízbe öntjük, diklór-metánnal extraháljuk, a diklór-metán-fázist mossuk és vákuumban bepároljuk. b) A kapott 3-(2‘,2 -dimetil-propilén-dioxi)-5-androszten-170-ol nyerstermékhez 20 ml acetont és 4 ml IN 35 kénsavoldatot adunk és 6 óráig visszafolyatás közben forraljuk. A reakciókeveréket hagyjuk lehűlni, jeges vízbe öntjük, metilén-kloriddal extraháljuk, a metilén-klorid-fázist mossuk és vákuumban bepároljuk. A kapott nyerstermé-40 két aceton/hexánból átkristályosítva 1,0 g 153-154 °C olvadáspontú 170-hidroxi-4-androszten-3-ont kapunk. 9. példa A 3. példa b) pontjában leírt körülmények között 1,5 g 3,3-etilén-dioxi-4-androszten-l7-ont hidrolizálunk és feldolgozzuk. 1,1 g 172—173,5 °C-on olvadó 4-andro- 50 sztén-3,17-diont kapunk. 55 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) általános képletű 5-androszten-17-on származékok — ahol Rí hidrogénatomot és 60 R2 rövidszénláncú alkoxiesoportot vagy R] és R2 együtt rövidszénláncú alkilén-dioxi-csoportot jelent -előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely (II) általános fcépletű szterin-származéjfokat - ahol 65 és R2 jelentése a fenti és
