182789. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3béta-hidroxi- 5-androsztén-17-on előállítására
182.789 lan részeket kiszűrjük, formaldehid-dimetilacetállal mossuk és az oldószert vákuumban ledesztilláljuk. Nátriumhidrogénkarbonát-oldat hozzáadása után a szilárd nyersterméket leszűrjük, vizzel mossuk, és szárítás után 440 g 5l(j-/metoxi-metoxi/T5“koíesztént kapunk. Az acetonból átkristályositott termék 79-80 C°-on olvad. 400 g igy előállitoft 33-/metoxi-metoxl/-5-kolesztént 120 g Teginnel, 10 liter desztillált vizzel és 40 ml 1 n nátriumhidroxld-oldattal 95 0° hőmérsékleten DR-3-6-6 tipusu Dispax-reaktorban /Jahnke und Kunkel, NSzK/ 30 percen át emulgeálunk. Az emulziót ezután 20 percen át 120 0° hőmérsékleten sterilezzük. d/ 50 literés fermentorba 40 liter sterilezett, 2,0% kukoricalekvárt, 0,3 % diammóniumhidrogénfoszfátot és 0,25 % Tagat'"'-02-t tartalmazó, 6,5 pH-értéku táptalajt mérünk, két liter fenti Mycobacterium inokulummal beoltjuk és 0,5 m’/óra levegőztetés és 250/perc fordulatszámú keverés mellett 24 órán át 30 0° hőmérsékleten inkubáljuk. Ezután a tenyészethez hozzáadjuk a c/ pontban előállított 33-/metoxi-metoxi/-5-kolesztén-emulziót és a fermentációt további 120 órán át folytatjuk. A fermentáció befejeztével a tenyészetet háromszor 5-5 liter etilén-kloriddal extraháljuk, az etilénkloridos fázist szűrjük és vákuumban bepároljuk. A kapott 156 g maradékot szilikagél oszlopón kromatografáljuk, majd etilacetátból át kristályosítjuk, és igy 86 g 33--/metoxi-metoxi/-5-androsztén-17-ont kapunk, C°. Op.: I29/I3I-I52 2. példa a/ 2 literes Erlenmeyer-lombikban 500 ml, az la példában megadott steril táptalajon és ugyanolyan körülmények között Mycobacterium spec. NBKL-B-3805 törzset tenyésztünk. b/ 10 g szitoszterint az le példában megadottak szerint reagáltatunk, és igy 11 g 24-etíl-3 -/metoxi-metoxi/-5-kolesztént kapunk. Az acetonból átkristályősitott termék 70-71 C°-on olvad. 10 g igy előállított 24-etil-3'-/metoxi-metoxi/-5-kolesztént 4 g Tegin/R/-rel és 300 ml vizzel 95 C° hőmérsékleten Ultra-Turrax-keszülékben /Jahnke und Kunkel, NSzK/ 10 percen át emulgeálunk. Az emulziót 20 percen át 120 0° hőmérsékleten emuigeáljuk. c/ 20, egyenként 85 ml steril, 2,0 % kukoricalekvárt, 0,3 % díammóniumhidrogénfoszfátot és 0,25 % Tagat/E/02-t tartalmazó, 6,5 pH-értéku táptalajt a fenti Mycobacterium előtenyészet 5-5 ml-ével beoltunk. I tenyészeteket 24 órán át 30 C° hőmérsékleten, 220/perc frekvenciával rázatjuk. Ezután minden tenyészethez 14 ml 24-etÍl-33-/inetoxi-metoxi/-5-kolesztén-szuszpenziót adunk, amely 0,5 6 vegyületnek felel meg, és a rázatás közben végzett fermentációt 120 6- rán át, 30 C° hőmérsékleten folytatjuk. Az ld példában leírtak szerint feldólgozva a lombikok tartalmát, 2,1 g 3(i-/metoxi-metoxi/-5-androsztén-17-ont kapunk. Op.: I3O-I32 00. 3. példa ' a/ 10,5 6 sztigmaszterint az le példában leírtak szerint 4
