182535. lajstromszámú szabadalom • Eljárás baktérium sejt-aggregátumok előállítására
5 182535 zük, a poliamin-polimerrel, amelyet a továbbiakban a (2) komponensnek nevezünk, pH-6-10-es közegben, 0—30 °C-on, 0,5—2,5 órán át reagáltatjuk. A térhálósítási reakció terméke az (1) és (2) komponens aktív anyagainak összsúlyára vonatkoztatva körülbelül 12—77 sűly% (1) komponenst és 23—88 sűly% (2) komponenst tartalmaz. A reakciótermékben a glutáraldehid tartalom az (1) és (2) komponensek összsúlyára vonatkoztatva 0-77 súly%, a cianúrsav-halogenid tartalom 0-22 súly%. A glutáraldehid és a poliamin-polimer közötti reakciót előnyösen pH 8-9-es közegben, 18-25 °C-on 0,5 órán át végezhetjük. A poliamin-polimernek a glutáraldehiddel való nem kívánt térhálósodása elkerülésére, a glutáraldehidet a poliamin-polimer amino-csoportjaira vonatkoztatva 1 : 1 mólarányban alkalmazzuk. A cianúrsav-halogenid és a poliamin-polimer közötti reakciót előnyösen pH 8-9-es közegben, 0—10°C-on 1-2 órán át végezzük. A poliamin-polimernek a cianúrsav-halogeníddel való nem kívánt térhálósodása elkerülésére a cianúrsav-halogenidet a poliamin-polimer amino-csoportjaira vonatkoztatva 1 : 1 mólarányban alkalmazzuk. A cianúrsav-halogenideknek, például cianúr-trikloridnak, három reaktív halogénatomja van. A három reaktív halogénatom közül az egyik 0°C-on vagy annál magasabb hőmérsékleten reagál. Az első halogénatom reagálása után, a második halogénatom 30-50 °C-on, végül a harmadik 90—100°C-on reagál. Első lépésben előnyösen a cianúrsav-halogenidnek csak az egyik halogénatomját reagáltatjuk a poliamin-polimerrel. Amikor a kapott térhálósított reakcióterméket a baktérium sejtekkel reagáltatjuk és a szárítás során magasabb hőmérsékletre melegítjük az aggregátumot, a cianúrsav-halogenid fennmaradt reaktív halogénatomjai a poliamin-polimerrel reagálnak és ezáltal a baktérium sejt-aggregátumhoz további keresztkötésekkel kapcsolódnak. A poliamin-polimer és a glutáraldehidet és cianúrsav-halogenídet tartalmazó kombináció közötti reakciót több lépésben végezzük. Első lépésben a cianúrsav-halogenidet reagáltatjuk a poliamin-polimerrel pH 8-9 -es közegben, 10°C-on, 1—2 órán át. Előnyösen oly módon járunk el, hogy a reakcióban a cianúrsav-halogenidet a poliamin-polimer amino-csoportjaira vonatkoztatva 1 :2 mólarányban alkalmazzuk. A reakcióelegyhez ezután fölösleges menynyiségű glutáraldehidet adunk és a reakciót azonos pH-értéken és hőmérsékleten 0,5 órán át folytatjuk. A találmány szerinti eljárásban alkalmazott térhálósított termék nem egy katíonos polielektrolit, mivel a poliamin-polimer amino-csoportjait, amelyek elsősorban biztosítanák a kationos jelleget, a glutáraldehiddel és/vagy cianúrsav-halogeniddel reagáltattuk, és ezáltal a termék szabad amino-csoportot nem tartalmaz. A baktérium sejt-aggregátumokat oly módon állítjuk elő, hogy a baktérium sejtek tömegét a fentiek szerint előállított térhálósított termékkel reagáltatjuk pH 8-9-es közegben, 0-30°C-on, 0,5-1,5 órán át, A térhálósított terméket olyan mennyiségben és koncentrációban alkalmazzuk, hogy a baktérium sejteket a sejtek szárazsúlyára vonatkoztatva 4,5-60 súly% térhálósított termékkel hozzuk érintkezésbe. A fenti reakció után a kapott baktérium sejt-aggregátumot extrudáljuk vagy valamely más módon a kívánt alakra hozzuk, majd néhány órán át 65 °C-on szárítjuk. A szárított aggregátum egy későbbi enzimes eljárásban való felhasználásáig tárolható. A felhasználás előtt a száraz aggregátum rehidratálható és a felhasználásra alkalmassá tehető. Ilyen kondicionáló eljárást ismertet például a 3 974 036 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás. A találmány szerinti eljárás előnye, hogy az eljárással előállított bakterum sejt-aggregátumok szilárdsága ismert baktérium sejt-aggregátumok szilárdságához képest a rehidrálás után megnövekszik. A szilárdság a baktérium sejt-aggregátumok részecskéinek összenyomással szembeni ellenállásával fejezhető ki. A szilárdság meghatározására CCT számú mérő elemmel ellátott, Instron-teszt készüléket alkalmaztunk a 3 935 069 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban ismertetett módon (gyártó: Instron Corporation, Canton, Massachusetts). Az alábbiakban a rehidrált termék szilárdságának vizsgálati módszerét ismertetjük: 9,68 g kobalt-klorid, 6HC1 (CoCl2 • 6HC1), 28,0 g magnézium-hidroxid [Mg(OH)j], 56,0 g vízmentes citromsav és 600 ml desztillált víz 45 °C-on való összekeverésével rehidráló oldatot készítünk. Az elegyet a sók oldódásának elősegítésére 60°C-ra melegítjük. Az oldatot ezután 25 °C-ra hűtjük, majd pH-ját nátrium-hidroxid oldattal 8,5 értékre állítjuk. Ezután az oldatot szüljük, majd a szűrlet térfogatát desztillált vízzel 1,0 literre állítjuk. A fenti oldat 2,5 ml-ét 130 ml vízzel, 70,3 g dextrózzal és 24,228 g trisz-(hidroximetil)-aminometánnal elkeverjük, majd az oldat pH-ját 25 °C-on nátrium-hidroxiddal 8,55-ös értékre állítjuk. Ezután az oldat térfogatát desztillált vízzel 200 ml-re egészítjük ki. 5 rész szárított baktérium sejt-aggregátumot és a fenti rehidáló oldat 2,5 ml-ét Petri-csészébe tesszük, majd vízfürdőn egy órán át 60 °C-on melegítjük, majd szobahőmérsékleten lehűlni hagyjuk. A részecskéket az oldatból elválasztjuk, eltávolítjuk a fölösleges felületi folyadékot, majd Instron-teszt készüléken vizsgáljuk. A mérőelemmel ellátott készüléket a mérés megkezdése előtt legalább 30 percig melegítjük. A keresztfej sebességét 0,2 in/min (5,1 mm/min), a papír haladási sebességét 2,0 in/min (51 mm/min) értékre állítjuk. A „Return”-jelű gombot oly módon állítjuk be, hogy a mérőelem felületétől 0,038 in (0,965 mm) távolságra álljon meg. A „Gage Length” jelű gombot úgy állítjuk be, hogy a mintatartály száját szabaddá tegye. Á regisztrálót a skála határértékére állítjuk. Ez általában 10 pound (4,54 kg). A regisztrálót oly módon kalibráljuk, hogy amennyiben a mérőelemen csak a mintatartály van, 0kg-ot vagy pound-ot mutasson, amennyiben a mérőelemen a mintatartály és 1 pound van, 1 pound-ot (0,454 kg) mutasson. Egy rehidrált részecskét a keresztfejjel a mintatartály közepére helyezzük. A keresztfejet kézzel a részecske tetejéhez közelítjük és megnyomjuk a „Run” jelű gombot. 0,03 in (0,762 mm) távolságra attól a ponttól, ahol a keresztfej elérte a részecskét 6 5 13 1.5 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
