182531. lajstromszámú szabadalom • Eljárás z-2-(acil-amino)-3-(monohtt)-propenoátok előállítására
9 182531 10 fölött 25 °C-on 2 órán át szárítjuk, 130 g (67%) mennyiségben a lépés címadó vegyületeté kapva fehér csapadékként. A termék NMR-spektruma (DMSO) a következő: S 5,7 (s, 2H, 0CH2), 7,5 (s, 5H,0) és 9,0 (so, 1H, HC=N). A termék termikusán nem stabil. 0 °C-on vagy ennél magasabb hőmérsékleten formamidra és benzil-kloridra bomlik. Nem észlelhető azonban jelentékeny bomlás -20 °C-on 2 hónapon át tárolva. B) lépés: N-formimidoil-tienamicin előállítása Nagyméretű (12 literes) főzőpohárba tienamicint adagolunk 6 liter 6,5-ös pH-jú és 28 g tienamicint tartalmazó vizes oldat (fermentlé betöményítése útján kaptuk) formájában, majd 0 °C-ra hűtjük. A főzőpoharat ezután felszereljük egy pH-mérővel és egy kielégítően gyors sebességű keverővei. Ezt követően a pH-t 8,5-re emeljük 3 n kálium-hidroxid-oldat óvatos adagolása (az oldatot cseppenként egy fecskendővel adtuk a kevert oldathoz) útján. Az oldathoz ezután 6 mólekvivalens (közel 100 g) szilárd benzil-formimidát-hidrokloridot adunk kis adagokban, miközben a pH-t 8,5 ± 0,3 értéken tartjuk, további 200 ml 3 n kálium-hidroxid-oldat fecskendővel történő adagolása útján. A benzil-formimidát-hidroklorid beadagolása 3-5 percet vesz igénybe. A reakcióelegyet ezután 0 °C-on 6 percen át keverjük, majd folyadékkromatográfiás vizsgálattal megállapítjuk a reakció teljességét. Amennyiben a reakció teljes, akkor a reakcióelegy pH-ját 7-re beállítjuk 1 n sósavoldattal, majd térfogatát megmérjük és ibolyántúli spektrumát felvesszük. Ezután a semleges reakcióelegyet 15 g/liter töménységig koncentráljuk 10 °C-nál alacsonyabb hőmérsékleten fordított ozmózis-egységet használva. A koncentrátum térfogatát megmérjük, majd szükséges esetben a pH-t 7,2-7,4 értékre beállítjuk. A koncentrátumot ezután közepes porozitású zsugorított üvegszűrőtölcséren átszűrjük a koncentrálás után még benne maradt szilárd anyag eltávolítása céljából. C) lépés: Dowex 50W x 2 gyantán végzett kromatografálás 0°C-on 18 liter kálium-formájú Dowex 50W x 2 gyantából (szemcsemérete 200—400 mesh) készült és előre lehűtött oszlopra felviszünk a B) lépésben kapott koncentrátumból 750—1000 ml-t (15-20 g terméket tartalmaz), majd az oszlopot 0—5 °C-on desztillált ionmentes vízzel 90 ml/perc átfolyási sebesség és 0—3,2 at fejnyomás tartása mellett eluáljuk. 4 literes, 2 literes és 1 literes előfrakciók elvétele után 18 450ml-es frakciót és egy 2 literes utolsó frakciót szedünk. Mindegyik frakciót ibolyántúli fénnyel elemzésnek vetjük alá (százszoros hígításban, az NH2OH-extinkciót elhanyagoljuk) és az elemzés alapján kiszámítjuk, hogy mindegyik frakció összesen mennyi N-formimidoil-tienamicint tartalmaz. Az elő- és az utófrakciókat folyadékkromatográfiás elemzésnek vetjük alá a terméktisztaság megállapítása céljából és elválasztjuk a termékben dús és tiszta frakciókat. Az összes ilyen frakciót egyesítjük, majd a kapott elegy pH-ját mind pH-mérővel, mind brómtimolkék indikátort tartalmazó oldattal megállapítjuk, majd szükséges esetben 7,2-7,4 értékre beállítjuk. Az összesen 3—4 liternyi elegyet ezután újra ibolyántúli fénnyel végzett elemzésnek vetjük alá. összes terméktartalma 15—16 g, ami a kromatografálási műveletre nézve 75% körüli hozamot jelent. Az elegyet ezután 10°C-nál alacsonyabb hőmérsékleten fordított ozmózisegységen a lehető legjobban betöményítjük, majd forgó bepárlóban 28 °C alatti hőmérsékleten koncentrációját 33 g/liter értékre beállítjuk. így mintegy 500 ml-nyi koncentrátumot kapunk. D) lépés : N-formimidoil-tienamicin kristályosítása A C) lépésben kapott koncentrátum pH-ját szükséges esetben 7,3-ra beállítjuk (ekkor N-formimidoil-tienamicin tartalma ibolyántúli elemzés alapján számítva mintegy 85-90%), majd közepes porozitású zsugorított üvegszűrőtölcséren nagyméretű Erlenmeyer-lombikba szűrjük. A koncentrátumhoz ezután hozzászűrünk ötszörös térfogatmennyiségű (közel 2200 ml) etanolt (3A minőség), majd az így kapott oldatot szobahőmérsékleten 10 percen át, illetve 0°C-on 12—24 órán át keverjük. A kivált kristályokról az anyalúgot leszívatjuk, majd a kristályokat először 0°C-on 0,1 térfogatnyi (közel 250 ml), a korábban említett minőségű etanollal, ezután pedig szobahőmérsékleten 1/25 térfogatnyi (közel 100 ml), ugyancsak a korábban említett minőségű etanollal mossuk. A kristályokat végül vákuumban 12—24 órán át szárítjuk, 40%-os összhozammal 10-12 g N-formimidoil-tienamicint kapva. Az említett vegyület több sarzsból kapott 50 g-os keverékével kapott analitikai eredmények a következők: Elemzési eredmények: számított: C =45,42%, H = 6,03%, N = 13,24%, S = 10,10%; talált: C = 45,82%, H = 5,72%, N = 13,10%, S = 10,14%. Izzítási maradék előre várt: 0,5%, talált: 0,47%. Fajlagos forgatóképesség (a)p5 =+89,4°. T.G. = 6,8%. UV2 max.300 MM, E% = 328. A találmány szerinti eljárással előállított I általános képletű vegyületek a tienamicin-származékkal együtt alakíthatók olyan gyógyászati készítményekké, amelyek a kétféle típusú vegyületen kívül a gyógyszergyártásban szokásosan használható hordozó- és/vagy segédanyagokat tartalmaznak. A kétféle vegyületet egyébként olyan mennyiségben használjuk, hogy a tienamicin-származék súlyaránya az inhibitáló hatású I általános képletű vegyületre vonatkoztatva 1 : 3 és 30 : 1, előnyösen 1 :1 és 5 :1 arányértékek közötti legyen. Az említett kétféle vegyület ugyanakkor beadható külön-külön is. így például a tienamicin-származék beadható intramuszkulárisan vagy intravénásán l-100mg/kg/nap, előnyösen 1-20 mg/kg/nap mennyiségben, vagy pedig naponta három vagy négy 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
