182482. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3'Ó-hidroxi-,3'ß-hidroxi- és 3'-oxo-leurozin-származékok előállítására
13 182 482 14 benzollal készített oldatához hozzáadunk 0,10 ml metil-izocianátot cseppenként és keverés közben. A reakcióelegyet lassan körülbelül 40 °C-ra melegítjük, majd körülbelül 2 1/2 óra hosszat ezen a hőmérsékleten melegítjük, utána pedig éjszakán át állni hagyjuk szobahőmérsékleten. A reakeiómenetet vékonyrétegkromatográfiával követjük. A reakcióelegyhez még hozzáadunk 0,05 ml metil-izocianátot és az egészet ismét 40 C°-on melegítjük körülbelül két óra hosszat. Ezt követően a reakcióelegyet szárazra pároljuk és így 57,3 mg maradékot kapunk, amely kiindulási anyagot és 3’a-(metil-karbamoiloxi)-4’-dezoxi-leurozidint tartalmaz. A maradékot I-es Woelm aktivitású szilikagélen kromatografáljuk olyan futtatószer alkalmazásával, amely benzol és kloroform 1:1 arányú elegye és növekvő mennyiségben metanolt tartalmaz. A terméket tartalmazó frakciók vékonyrétegkromatográfiás vizsgálata azt mutatja, hogy ez eltér a kiindulási anyagtól. A frakciókat egyesítjük és bepároljuk, így 48 mg 3’a-(N-metil-karbamoiloxi)-4’-dezoxi-leurozidint kapunk. A terméket szilikagélen újból kromatografáljuk 20:1:1 arányú éter: dietilamin: toluol oldószer-rendszerrel, amely növekvő mennyiségben (0,5—15%-ban) metanolt tartalmaz. Uy módon tiszta 3’a-(N-metil-karbamoiloxi)-4’-dezoxi-leurozidint tartalmaz. A szulfátsót 2%-os etanolos kénsavval állítjuk elő. IR-spektrum (CHC13): csúcsok 3440, 2980, 2935, 1722, 1218 cm1_-nél. 7. példa 4-dezacetii-3’«-hidroxi-4’-dezoxi-leurozidin-3-karbohidrazid előállítása 300 mg 3’a-hidroxi-4’-dezoxi-leurozidint feloldunk 9 ml vízmentes metanolban. Ezután 6 ml 97%-os hidrazint adunk az oldathoz, a reakcióedényt nitrogéngázzal átöblítjük és lezárjuk. A reakcióelegyet hét végén át körülbelül 65 °C-on melegítjük, majd szárazra pároljuk és a maradékot kétszer extraháljuk etanollal a maradék hidrazin kinyerése érdekében. Vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat két anyag jelenlétére utal. A vegyületet I-es aktivitású Woelm szilikagélen kromatografáljuk, az eluálást 2:1 arányú benzol :kloroform oldószer-eleggyel végezzük, amely 1% trietilamint és növekvő mennyiségű metanolt tartalmaz. Azokat a frakciókat, amelyek vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatnál 4-dezacetil-3’a-hidroxi-4’-dezoxi-leurozidin-3-karbohidrazidot tartalmaznak, egyesítjük. Az ebből nyert vegyület (150 mg, 53%-os kitermelés) fizikai jellemzői: IR-spektrum yCHCl3 3440, 1732, 1676, 1618, 1501, -1485, 1460 és 1221; 100 megahertz proton mágneses rezonancia spektrum : • őTMS CDClj 9.47 (brs, 1H, c (3)—OH) ; 8,23 és 7,94 (brs, 1 az 1H indol NH); 7,52 (m, 1H, C(ll)—H)\ 7,18 (brm, 3H, C (12’, 13’, 14’)—H) ; 7,0 (br, 3H, C (3) CON# Ntf „) ; 6,52 (s, 1H, C (14)—H) ; 6,08 (s, 1H, C (17—H) ; 5,80 (brd, 2H, C (6,7) —H) ; 4,16 (s, 1H, C (4)—H) ; 3,9 (s, 3H, C (16) —OCH 3) ; 3,59 (s, 3H, C (18’)—COOCtf 3) ; 3,42 (s, 1H, C (2) —H) ; 2,76 (s, 3H, N (1)—CH_3); 2,59 (s, 1H, C (19)—H). A hidrazidot aziddá alakítjuk a 837 390 számú belga szabadalomban ismertetett módszer szerint, az azidot pedig metil-aminnal reagáltatjuk és így 4- -dezacetil-3’a-hidroxi-4’-dezoxi-leurozidin-3-N-metil-karboxamidot kapunk. 8. példa 3’a-hidroxi-4’-dezoxi-l-demetil-l-formil-leurozidin előállítása 203 mg 3’a-hidroxi-4’-dezoxi-leurozidint acetonban oldunk. Az oldathoz körülbelül 0,12 ml 2,2 mólos kénsavat adunk, amelyet úgy készítünk, hogy 2,5 ml 18 mólos kénsavat 19,9 ml vízzel hígítunk. Az oldatot körülbelül —50 °C-ra hűtjük és egy második oldatot adunk hozzá, amely 225 mg krómtrioxidot tartalmaz 2,5 ml ecetsavban és 0,25 ml vízben. Az oldatot cseppenként, 5 perc leforgása alatt mágneses keverés mellett adjuk az elegyhez, így sötét színű, külső megjelenésében homogén reakcióelegyet kapunk. A reakcióelegyet —50°C-on további 20 percig keverjük és utána óvatosan lehűtjük —65 °C-ra, majd ezen a hőmérsékleten hozzáadunk 5 ml 14 n vizes ammóniumhidroxid-oldatot. A keletkező elegyet 125 ml jég-víz .elegybe öntjük. A kapott vizes réteget kloroformmal háromszor extraháljuk, a szerves kivonatokat egyesítjük, híg, vizes nátrium-hidrogén-szulfit-oldattal mossuk és szárítjuk. A szerves oldatot vákuumban betöményítjük és így 190 mg zöldes színű szilárd anyagot kapunk. Vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat nem ad a kiindulási anyagnak megfelelő foltot, de megjelenik egy nagyobb új folt. A zöldes színű maradékot ezért 20 g szilikagélen kromatografáljuk. A kromatogramot 30—30 ml-es adagokból álló 2:1 arányú benzol: kloroform oldószereleggyel, amely 6, 9, 13, 5, 20, 30 és 45% metanolt tartalmaz, hívjuk elő. A kromatografálásnál 10 ml-es frakciókat fogunk fel. A 14—-22. frakciókat egyesítjük, amelyekből az oldószer lepárlása után 131 mg világoszöld színű szilárd anyagot kapunk, amely a fenti reakcióban képződött 3’a-hidroxi-4’-dezoxi-l-demetil-l-formil-leurozidin. A vegyület a vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatnál egy foltot ad és fizikai jellemzői a következők : IR-spektrum (kloroformban) : csúcsok 3480,1746, 1692 és 1220 cm-1-nél; UV-spektrum: X®*® = 215 (e=3,75x10% 222, 256, 298 nm NMR : 8,79 (CHO), 8,03 (indol NH) ; nincs csúcs NCH3-ra. A vegyületet a megfelelő szulfáttá 2%-os (tf/tf) etanolos kénsavval való kezeléssel alakítjuk át. A 4’-dezoxi-leurozidin és a 4’-dezoxi-vinkaleukoblasztin 3’-oxigénezett származékai hidrazid-származékainak, valamint a megfelelő 1-formil-vegyületeknek az előállítása során, az említett hidrazin-azid-amid reakciósor rendszerint azt eredményezi, hogy valamely 4-dezacetil-származéknál, ahol az acetil-csoport eredetileg a C—4 helyzetben van, e reakciók folyamán hidrolizálódik. A 4-dezacetil-amidok legtöbbje újra acilezh'ető valamely alifás anhidriddel vagy savkloriddal a megfelelő C—4- -aciláttá a 3 392 173 számú Amerikai Egyesült. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
