182454. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 3,4-diaza-biciklo[4.1.0]hept-én-5-onok előállítására
13 182454 14 Illb és IVb képletű aminofenil-diaza-biciklo[4.1.0] heptenonok reakcióját egy XVII általános képletű dialkoxitetrahidrofuránnal sav jelenlétében és célszerűen megfelelő oldószer jelenlétében 60—140 °C, előnyösen 80-120 °C hőmérsékleten végezzük. A reakciót végezhetjük például aromás szénhidrogénben, így toluolban, katalitikus mennyiségű szulfonsav, így benzol- vagy p-toluolszulfonsav vagy ecetsav jelentélében. Meg kell jegyeznünk, hogy az I általános képletű vegyületek a 3,4-diaza-bicikIo[4.1.0]hept-2-en-5-on gyűrű 1- és 6-helyzetében aszimmetriás szénatomot tartalmaznak, és ezeket a vegyületeket racemátok alakjában kapjuk. A találmány szerinti eljárással az enantiomereket is előállíthatjuk, amelyeket a szokásos módon optikailag aktív savval, így dibenzoilborkősavval vagy kámfor-10-szulfonsavval választhatunk szét. Ezt a szétválasztást adott esetben már valamely közbeeső művelet során elvégezhetjük. A talál nány szerint előállított 2-aril-3,4-diaza-b i c iklo [4.1.0 jheptenonok tr ombo cita-aggregációt gátló erős hatásukkal és erős vérnyomáscsökkentő hatásukkal tűnnek ki, ezért mint vérnyomáscsökkentő szerek is használhatók, és trombo-embóliás megbetegedések megelőzésére és kezelésére alkalmazhatók. A találmány tárgyát képezi továbbá gyógyszerkészítmények előállítása, amelyek a szokásos gyógyszerészeti hordozó- és hígítóanyagok mellett hatóanyagként egy I általános képletű vegyületet tartalmaznak, valamint ezeknek a vegyületeknek a felhasználása terápiás célokra, magas vérnyomás vagy trombo-embóliás betegségek kezelésére. A találmány szerint előállított termékek farmakodinamikus tulajdonságainak vizsgálatára az alábbi módszereket használtuk : 1. Emberi trombociták kollagénnel indukált aggregációjának a gátlása in vitro Vénás, citrátos vér centrifugálásával (300 g, 4 °C, 10 perc) tromboeitában dús plazmát állítunk elő. A trombocita-aggregáció fotometriás mérését MgCl2 (végső koncentráció 10 mmól/liter) és kollagén (Stago) (végső koncentráció 0,02 mg/ml) hozzáadásával Born-Aggregometer MK 3-ban végezzük. Az aggregáció mértéke a maximális extinkció másodpercenkénti változása. A kísérleti anyagok aggregációt gátló hatását 10 perc inkubálási idő után mérjük. EC 50% azt a koncentrációt jelenti, amely az aggregáció 50%-os gátlását előidézi. 2. Patkány-trombociták kollagénnel indukált aggregáció jának gátlása ex vivo A kísérleti anyagokat orálisan beadjuk Sprague— Dawley 200—250 g-os hím patkányok 10—15 patkányból álló csoportjainak. A kezelés után 1—4 órával a patkányoktól étemarkózisban vért veszünk, és centrifugálással tromboeitában dús plazmát állítunk elő. A kollagén hozzáadása után az aggregációt a fentiek szerint mérjük. ED 33% az a dózis, amely a kollagénnel indukált trombocitaaggregációt 33%-ban gátolja. 3. Vérnyomáscsökkentő hatás narkotizált patkányon A vérnyomáscsökkentő hatás vizsgálata céljá\ ból 240—280 g súlyú, hím Sprague—Dawley patkányok 3—5 patkányból álló csoportjainak uretánnarkózisban (1,78 mg/kg i.p.) intraperitoneálisan beadjuk a kísérleti anyagokat. Az artéria carotisban mérjük a vérnyomást Statham—Transducer-ral. ED 20% jelenti azt a dózist, amely a catoris-vémyomás közepes értékét 20%-kal csökkenti. 4. Vérnyomáscsökkentő hatás spontán magas vérnyomású patkányokon A kísérleti anyagokat orálisan beadjuk 270—340 g súlyú, spontán magas vérnyomású hím Okamoto patkányok 4—8 patkányból álló csoportjainak. A szisztolés vérnyomást a kezelés előtt és után 2 órával piezokristályfelvevőkkel, vér nélkül mérjük. Az ED 20% — tekintetbe véve a kezeletlen kontrollállatoknál mért értékeket — az a dózis, amely a szisztolés nyomást 20%-kal csökkenti. A hatásos dózisokat, illetve koncentrációkat a dózisok, illetve koncentrációk és a hatás logaritmusai között fennálló lineáris összefüggésekből számítottuk ki regressziós analízis segítségével. A trombocita aggregáció gátlásához összehasonlító anyagként acetilszalicilsavat, a vérnyomáscsökkentő hatáshoz dihidralazint használtunk. Az 1. táblázat eredményei szemléltetik, hogy a találmány szerint előállított vegyületek rendkívül erősen gátolják az emberi trombociták kollagénnel indukált aggregációját. A hatás 73—3530-szor erősebb, mint az ismert aggregációgátló gyógyszeré, az acetilszalicilsavé. A trombociták aggregációja mellett különböző erősségű vérnyomáscsökkentő hatás is fellép. Az egyes vegyületek a patkányoknál erősebb hatást gyakorolnak, mint az ismert vémyomácsökkentő szer, a dihidralazin. Amint az a 2. táblázatból látható, a 13. és 11. példák szerinti vegyületek a dihidralazin hatásánál 7,25-ször, illetve 2,52-szer erősebb hatást mutatnak. A gyógyszerterápiás alkalmazásnál különleges jelentősége van annak a ténynek, hogy a trombocitaaggregáció orális beadás esetében is igen erős in vivo, és ez a hatás messze felülmúlja az acetilszalicilsavét, amint azt a 3. táblázat szemlélteti (7., 11., 13. és 20. példák szerinti vegyületek). Hasonlóképpen kimutatható a vérnyomáscsökkentő hatás spontán magas vémyomású patkányoknál a 7., 11., 13. és 20. példák szerinti vegyületek orális beadása után. 1. táblázat Kollagénnel indukált trombocitaaggregáció gátlása in vitro Yegyület Az aggíegáció gátlása1 (példa száma) EC 50% R.H.2 7. 0,14 3530 10. 6,81 73 11. 0,28 1760 12. 0,95 518 13. 5,57 89 14. 0,38 1310 15. 1,87 264 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
