182151. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új indolizin-származékok és azokat hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
182.151 III. Az adenozin-dezamináz hatásának inhibiciója A/ In vitro teszt A tesztet borjú bélből származó adenozin-dezaminázzal végeztük. A következő kísérletet végeztük: Az abszorpciós cellába a következő oldatot töltöttük: 2,7 ml 0,1 mólos foszfát-puff er oldat /pH = 7,4-/, 0,5 ml 10“4 vagy 5.10”^ mólos adenozln oldat foszfát-pufferben oldva /az adenozln végső koncentrációja 10~5 vagy 5.10-5 mól/, 0.01 ml a vizsgált vegyület 3»10“3 mólos etanolos oldatából /kb. 10"2 egység/. Az abszorpciós cella tartalmát 2 percig inkubáltuk, és az ensimatikus reakciót 0,05 ml ismert enzimkoncentrációju kereskedelmi adenozin-dezamináz adagolásával megindítottuk. A reakciót 50 °C-on végeztük, és az adenozinnak az adenozin-dezamináz hatására inozinná való alakulására bekövetkező abszorpciócsökkenést főtometrikusan rögzítettük 265 nm-nél. Az enzimatikus reakciót a következő egyenlettel szemléltethetjük. adenozln + HgO adenozin-dezamináz inozin + NH^ A fent leirt kísérletet végeztük el kontroliképpen ugyanolyan összetételű oldattal, vizsgálandó vegyület nélkül. Megszerkesztettük az abszorpciócsökkenés görbéjét az idő függvényébe egyrészt az inhibitort tartalmazó oldat esetén^ másrészt a kontroll oldat esetén. A görbék meredekségét mértük, és az egy perc alatt képződő inozin móljainak számában fejeztük ki. Ezután kiszámoltuk a találmány szerinti vegyület által okozott adenozin-dezamináz aktivitás inhibició százalékát. A következő eredményeket nyertük: 5« Táblázat B X, Az adenozin-dezamináz hatásának in vitro inhibiciója /%/ 10"5mól 5.10"5mól adenozln adenozln n-butil H H n-propil H H fenil H II 4-fluor-fenil H H fenil r H H 5-bróm-fenil Cl H fenil Br H n-butil Br H 4-fluor-fenil H H izopropil Br Br fenil Br Br izopropil H Cl fenil Br Cl Br 60 _ Cl 42-Br 78 — Br 60 mi Cl 58 — H-55 H-52 H 4-5-OCH,-39 H P 75 54-H 100 . 88 Cl-76 H — 86 11
