182144. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hipikoleszrterémiás hatású vegyületek előállítására fermentációs úton
182.144 4800 literes tenyészetből a 7* példában ismertetett módon elkülönített nyers ammóniumsót laktonizáláanak vetünk alá úgy, hogy vizben oldjuk, a kapott vizes oldat pH-ját J-ra beállítjuk tömény sósavoldattal, toluollal extraháljuk és két órán át visz- 3zafolyató hütő alkalmazásával forraljuk, mint azt a 15. péj.da B/2. részében ismertettük. Vákuumban végzett koncentrálás eredményeképpen kis mennyiségben a nyers I képletü vegyület kristályait kapjuk, a II képletü vegyület még kisebb mennyiségével keverve; ezeket kiszűrjük és szárítjuk. 12 párhuzamos fermentálásnál kapott ilyen anyagot egymással kombinálunk, majd 45,45 kg etanolból átkr istályositunk, szűrünk és etanollal mosunk. Az egyesitett anyalugokat és mos ofolyadékokat vákuumban mintegy 11,4 literre betöményitjük, majd az I képletü vegyület kristályainak második adagját kiszűrjük. Az ekkor végzett szűrésnél kapott anyalugot a következőképpen dolgozzuk fel. Az anyalugból közel 0,5 litert előkészítünk foridott fázisú kromatografálásra uçy, hogy először az etanol eltávolítása céljából vákuumban betömenyitjük, acetonitrillel átmossuk és az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük. Ezután 100 ml acetonitrillel készült oldatát atbocsátjuk C-18 jelzésű forditott-fázisu töltet 200 ml-es ágyán, majd az ágyat további 1 liter acetonitrillel mossuk. Az egyesitett szürletet és mosófolyadékot betöményitjük, ma^jd feloldjuk acetonitril és viz 60 : 40 térfogatarányu elegyébol 360 ml-ben. Az igy kapott oldatot a nyomnyi menynyié égü oldhatatlan rész eltávolítása céljából szűrjük. Az ebből az oldatból vett aliquot szárazanyagtartalmának meghatározása alapján az összes szárazanyagtartalom 15,3 g. Ebből a törzsoldatból 160 ml-t ezután kromatografálásnak vetünk alá Waters Prep 500 kromatográfiás rendszeren, C-18 fordított fázisú töltetet /a korábban említett Waters Associates cég terméke, szilicium-dioxidon kötött oktadecil-bevonattal/ tartalmazó, 5 cm x 30 cm méretű oszlopbetétet, eluálószerként pedig 130 mg/perc eluálási sebesség mellett acetonitril és viz 60 ï 40 térfogatarányu elegyét has zilálva, szobahőmérsékleten és az eluátum törésmutatójának állandó észlelése mellett. Az első 3900 ml eluátum szennyeződést tartalmaz, igy elöntjük. Az I képletü vegyület nagy csúcsa jelentkezik a 3900. és a 5850. ml között, ezt a frakciót félretesszük. Az eluátum 5850. és 6500. ml-e között vegyes frakciók képződnek, ezeket félretesszük újbóli kromatografálás céljára. A tisztított II. vegyületet az utolsó csúcsként kapjuk; a 6500. és 8450. ml közötti frakciót összegyűjtjük, majd mintegy 3 g 3ulyu olajos maradékká koncentráljuk. A II képletü vegyület ezen koncentrâturnának felét /körülbelül 1,5 g/ ezután kromatografáláshoz felkészítjük a IV képletü vegyület ammóniumsójává alakitva úgy, hogy keverés közben 6 ml meleg metanollal oldatot készítünk belőle, az oldathoz azonnal a pH 10,5-11 értékre való beállításához szükséges mennyiségű 1 n nátrium-hidroxid-oldatot adunk /3j5 - 5»8 ml lugoldatra .van szükség/, a kapott elegyet 0,5 órán at állni hagyjuk és ezután a nyomnyi mennyiségű oldhatatlan részt kiszűrjük. A szürletet átszivattyuzzuk olyan, 25,4 mm x 863,6 mm méretű oszlopba, 'amelyet 200 - 325 mesh szemcseméretüre őrölt XAD-2 gyantával :/sztrirol - divinil-benzol kopolimer/ töltöttünk meg. Az eluáláat ^•0°C-on 2 ml/perc sebességgel 23 térfogat% acetohitrilból és 77 térfogat% 0,1 n ammónium-hidroxid-oldatból álló eleggyel végez21
