182075. lajstromszámú szabadalom • Eljárás monacolin K előállítására
182.075 A kapott 225 S összesített olajos terméket adszorbeáltatjuk egy oszlopon^ amely 3 kg azilikagélt /Wakogel 0-200/ tartalmaz, melyet előzőleg benzollal kezeltünk. Az oszlopot eluáljuk egymást követően 10 liter benzollal, majd 180 liter 4:1 térfogatarányu metilén-klorid - etil-acetát - eleggyel. Az aktiv frakciókat bepároljuk, mig 30 g olajos terméket nyerünk, majd adszorbeáltatjuk egy 450 g azilikagélt A/akogel 0-200/ tartalmazó oszlopon, amelyet előzőleg hexánnal kezeltünk. Az oszlopot eluáljuk egymást követően 2 liter hexánnal, 30 liter 9:1 térfogatarányu hexán - aceton eleggyel és 30 liter 4:1 térfoga tar anyu hexán - aceton eleggyel. Az aktiv frakciókat besűrítjük és a csapadékot leszűrjük. A szürletet bepároljuk, mig 4 g olajos terméket kapunk, amelyet adszorbeáltatunk egy 96 § szilikagélt /Wakogel 0-200/ tartalmazó oszlopon, amelyet előzőleg hexánnal kezeltünk. Az oszlopot eluáljuk egymást követően 500 ml hexánnal és 6 liter 9:1 térfogatarányú hexán -aceton elegygyel. Az aktiv frakciókat bepároljuk, mig 521 mg olajos terméket nyerünk. A nyert terméket adszorbeáltatjuk egy 30 g szilikagélt /Wakogel 0-200/ tartalmazó oszlopon, amelyet előzőleg benzollal kezeltünk. Az oszlopot eluáljuk egymást követően 10 ml benzollal, 100 ml 95:5 térfogatarányu benzol - etil-acetát eleggyel és 900 ml 4:1 térfogatarányu benzol - etil-acetát eleggyel. Az aktiv frakciókat bepároljuk, mig 92 mg színtelen kristályos terméket nyerünk, amelyet vizes acetonból átkristályositunk, és 54 mg Monacolin K-t nyerünk színtelen, tü alakú kristályok formájában. 2-5» példa 300 liter tápközeget, amelynek pH-ja sterilezés előtt 6,0 és 2 vegyes % glükózt, 2 vegyes % peçtont /Kyokuto brand, beszerezhető Kyokuto Seiyaku KK, Japán/ és 0,3 vegyes % kukoricalekvárt tartalmaz, egy 600 literes fermentorba töltünk, és beoltjuk az 1. táblázatban felsorolt mikroorganizmusok valamelyikével. A tenyésztést 27 °C-on 96 óra hosszat folytatjuk 300 1/perc sebességű levegőztetés és Í90 ford/perc sebességű kevertetés mellett. A tenyésztési idő végén 1 ml-t kiveszünk a tápközegből, és 3-4 pH-értékre beállított etil-acetáttal extraháljuk. Az extraktumot ezután 0,2 ml reakcióelegyben oldjuk fel,amelynek leírása megtalálható: M. Kuroda, Y. Hazama-Shimada és A. Bdo, Biochim. and Biophys. Acta., 486 /1977/ 254 - 259 /"Szterolszintézis gátlása citrinnel patkánymájból és élesztőből származó sejtmentes rendszerben”/ es A. Edo, M. Kuroda és Y. Tsujita, Journal of Antibiotics /kiadja a Japanese Antibiotics Research Association/ 2g, 12. szám /1976. december/ 1346 - 1348 és meghatározzuk a ‘koleszterin bioszintézisének százalékos gátlás át. Az eredményeket az 1. táblázat tartalmazza gátlás-aktivitás egységekben táptalaj milliliterenként. A koleszterin bioszintezisenek 50 %-os gátlása jelent 1 egységet milliliterenként. 1. táblázat Példa- Mikroorganizmus Gátlás-aktiviazárna ______________________ tás egység/ml 2. Monascus purpureus SANK 10271 120 7
