182069. lajstromszámú szabadalom • Eljárás monacolin K antihiperkoleszterémiás hatású vegyületek előállítására
182.069 például szilárd vagy rázott vagy levegőztetett és kevert kultúrában. A mikroorganizmus széles hőmérséklettartományban tenyészthető, például 7 es 4-0 °C között, de Monacolin K termelésére legelőnyösebb 20 és 35 °C közötti hőmérsékletet alkalmazni. A mikroorganizmus tenyésztése során a Monacolin K képző-' dését figyelhetjük a tápközegből való mintavétel és a mintában a Monacolin K fiziológiai aktivitásának az alább leirt módon való mérése utján. A tenyésztést addig folytathatjuk, amig jelentős mennyiségü Monacolin K halmozódik fel a tápköze^ben^ ekkor a Monacolin K-t izolálhatjuk a tápközegből fizikai es kémiai tulajdonságainak megfelelően választott elválasztási technikákkal. így például a következő elválasztási technikák bármelyikét alkalmazhatjuk: a fermentléből hidrofil oldószerrel /például dietil-éterrel, etil-acetáttal, kloroformmal vagy benzollal/ való extrahálása, a mikroorganizmusok hidrofil oldószerrel / például acetonnal vagy alkohollal/ való extrahálása, besürités, çolàrosabb oldószerbe /például acetonba vagy alkoholba/ való atoldás, a szennyezések eltávolítása egy kevésbé poláros oldószer /például petroléter vagy hexán/ alkalmazásával/, gélszürés megfelelő anyaggal, például Sephadexszel töltött oszlopon, abszorpciós kromatográfia aktivszénnel vagy szilikagélen. Ezeknek a technikáknak a megfelelő kombinálásával a Monacolin K tiszta formában nyerhető ki a tenyészetből. A Monacolin K tulajdonságai a következők: Színtelen kristályok, amelyek 157-159 °C-on olvadnak bomlás közben. Összegképlete Cp^H^Oj-, elemanalizisének eredményei: C = 71*56 %, H = 8,85 % és 0 =19,59 %• Tömegspektrometriásan meghatározott molekulasúlya 4-04. Metanolban felvett ultraibolya abszorpciós spektrumát az 1. ábra mutatja; maximumok észlelhetők 232, 238 és 24-6 m/u-nál. Kálium-bromid pasztillában felvett infravörös abszorpciós spektrumát a 2. ábra mutatja; deutero-kloroformban, tetrametil-szilán belső standard alkalmazásával felvett ME spektruma /proton 60 MHz/ a 3* ábrán látható. A 4-. ábra a deuter o-m et an ólban felvett HME spektrumot /15c/ mutatja. A Monacolin K oldható rövidszénláncu alkoholokban /például metanolban, etanolban és propanolban/, valamint acetonban, kloroformban, etil-acetátban és benzolban. Oldhatatlan petroléterben és hexánban. Optikai forgató képessége:^ ^5 = + 307,6 /c = 1, metanolban/. Vékonyrétegkromatográfiás f ut tatás sál 'E^= 0,47-nél jelentkezik folt; a futtatást a Merck et. Co. Inc. Ltd. által gyártott No. 5715 Kiesel-gel 6OE254 szilikagélen végeztük, futtatószerként metilén-klorid: aceton = 4:1 arányú elegyét alkalmazva. A detektálást a folt ultraibolya sugárelnyelő tulajdonsága alapján vagy a lemezt 50 térfogat%-os kén-^ savval vagy jóddal bepermetezve végezzük. Kénsavas bepermetezéS" esetén melegítés hatására a folt világos vörös-vörösesbarna"szlnüvé válik. A Monacolin K semleges anyag és semleges vagy vizes savas közegben oldhatatlan. 'Lúggal kezelve savas jellegű anyaggá alakul, amely vizoldható. Ez a savas jellegű vegyület savas pH-n etil-acetáttal vagy kloroformmal extrahálható és az oldószer bepárlásával visszaalakul Monacolin K-vá. A Monacolin K fiziológiai aktivitása kvantitative is meghatározható a következő in vivo teszt segítségével. In vivo teszt nyulakon
