182005. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens alfa-amiláz meghatározására

182.005

b/ fenil-O^-D-tr i-/tetra/-glükopiranozid + 3/4/HgO

fenol + 3 /4/ glükóz

c/ fenol + HS K + 02 mqnofenoloxldâz^ szinezélj. + 2 HgO Mérési körülmények;

25 °G, hullámhossz 492 nm, 1 cm-es küvetta; a reagensösszetételt a következő táblázat mutatja.

Heagens

Foszfátpuffer, pH * 7»4 Nátrium-klórid F e n i 1-0^-D-ma 11 ohe p t a 0 z i d HSK

Monofenoloxldáz

p^-Glükozidáz

Koncentráció a vizsgálatnál 0,05 mól/liter,

0,05 mól/1,

10 mmól/1,

1 mmól/1,

1 egyaég/mli 10 egyaég/ml.

______Vizsgálati térfogat; 2,0 ml, _ ____ __________________

Foszfátpuffer helyett glicln-, glicll-gllcin-, HEPES-, triaz-, tra- és egyéb puffer ia használhatónak bizonyult.

4. példa.

DÉ-Amiláz meghatározása p-nltro-fenil-maltoheptaozidéal.

A vizsgálat elve: ,

/p-n i tr o—fenil/—0^-malt ohept.aozi d--—•>/ g lükó z / + /p-nitr o-fen il/-(%-/glükóz/m ■ n glükóz +

p-nitro-fenol.

A maltoheptaozid hasítása után a hasítási termékek glükózra éa p-nitro-fenolra hasadnak. A p-nitro-fenolát anion lúgos oldatban sárga szinü, és ezért optikai utón közvetlenül mérhető.

Vizsgálati rendszer:

Beakcióelegy: 50 mmól/1 foazfátpuffer, pH = 7 »4

50 mmól/1 nátrium-klór id,

5-50 egység/1 oí-glükozidáz,

5 111. 10 mmól/1 /p-nitro-fenil/-ú£-maltoheptaozld.

Vizsgálati elegy:

1 ml reakcióelegy + 50 /ul minta /szérum/.

Hőmérséklet: 30 °0.

Hullámhossz: 405 nm.

Szérum hozzáadása a mérési hőmérséklet elérése után /10 pero előinkubáció/.

5. példa

0(-Amiláz-meghatározáa maltoheptaittel.

10