182005. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens alfa-amiláz meghatározására
182.005 A találmány tárgya eljárás és reagens oC~amiláz meghatározására. Az OC-amiláztültör meghatározása a szérumban fontos kllnlt kai paraméter a hasnyálmirigymüködés szempontjából. Az o4-amiláfe meghatározására szolgáló kereskedelmi forgalomban levő reagensek túlnyomórészt egy olyan rendszeren alapulnak, amelyben az 0<-amlláz keményítőt bont le, és a keletkezett töredékeket mérjük látható vagy ultraibolya tartományban aszerint, hogy a vizsgálatnál amiláz-szubsztrátként színezett keményítőt vagy nativ keményítőt használunk. Ilyen eljárás illetve reagensek lényeges hátránya, hogy a keményítő makromolekulaként csak kevéssé kielégítően jellemezhető és állandósítható, úgy hogy az egyes tételek átszámítási hányadosai nagyon eltérően szórnak, és a méréseknél mindig standardot kell alkalmazni, j’obb eredmé— nyék elérésére egységes szubsztrát lenne szükséges, amely a ha^ sitásnál megbízható eredményeket szolgáltat. Egységesebb szubsztrát irányába egy lépést a maltopenta»óz alkalmazása jelentett. Ezt az OÉ-amiláz maltotriózra és maitózra hasítja, a maltotriózt és maltózt az o(-glükozldáz glükóz*zá alakítja át* amelyet azután tetszés szerinti módszerekkel, például az ismert hexokináz-raódszerrel határozunk meg. A maltopentaóz mellett már a maltotetraózt és a maltohexaózt is javasolták szubsztrátnak /3 879 263 és 4 000 042. se. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás/. A tetraózzal azonban lényegesen rosszabb eredményeket értek el, mink a pen-! taózzal, és a hexaózzal még rosszabb eredményeket, mint a tét-1 raózzal. A maltotetraóz és -pentaóz esetében még sztöqhiometrikua reakció adható meg, a hexaóz esetében azonban már élt ér aek állapíthatók meg a sztöohlometrikus reakciótól. A maltopentaóz hátránya még, ami a tetraóznál is megállapítható, hogy jelentős reagens-vakért ék lép fel, azaz a méröreakoió már fut, mielőtt a meghatározandó mintát hozzáadjuk.; Ehhez még hozzájön, hogy ez a reagens-vakérték nagyobb szubszt1- rátkonoentráoióknáí nem állandó, hanem több mint 25 percig válK tozik, ^lelőtt ennek a mell ékreakciónak a konstansát eléri. Az' is kiderült , hogy a maltopentaóz pankreász-oC-amiláz és nyál-o(-| -amiláz által történő feltételezett eltérő hasitása, amely-megkülönböztetést tenne lehetővé, ténylegesen nem áll fenn. lJaB/ :0« £4£, 3917 « 5927 /19?0/i J. Blochern. 51, p. mi /1952//T I A találmány célkitűzése ezért az, Kogy egy olyan eloárást és egy olyan reagenst szolgáltasson az (v-amiláz meghatározására, amelynél olyan szubaztrátot alkalmazunk, amely tisztább és egységesebb, mint az ismert azubsztrátok, könnyen hozzáférhető, és szérum nélküli vakérték, a lag-fázia időtartama és aá elérhető maximális aktivitás tekintetében a követelményeknek megfelel. Továbbá egy egyszerű mérési módszer keli, amely drág* éa komplikált berendezések nélkül megvalósítható, és gyors-diágnosztikumokhoz, Így tesztcsíkokhoz megfelel. • ■ A találmány szerint ezt a feladatot ot-amiláznak egy OC-amilázszubsztrát enzimes hasításával és az - adott esetben átalakított - hasitási termék mennyiségének a fotometriáa mérésére szolgáló olyan eljárással oldottuk meg. amelyre az jellemző, hogy szubsztrátként egy í általános képletü VegyÜletet alkalmazunk, ahol B jelentése glükozid-* fen i1-glükoz id-, mon on i tr o-f en i1-glükozid-s dinitro-feníl-glükozid-, azorbit- vagy giükonsavosoport.
