181940. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vinkánszármazékok parenterális beadására alkalmas oldatainak előállítására
7 181940 8 280nm-nél detektáltuk. Az elválasztást „MicroPak SI-10” oszlopon végeztük; eluensként kloroform és abszolút etanol 95: 5 térfogatarányú elegyét használtuk, 20 ml/óra áramlási sebességgel. 2,0 ml fenti módon elkészített és a kívánt pH-értékre beállított vinkanol-oldatot mértünk be egy 50 ml-es rázótölcsérbe, 20 ml 1%-os vizes nátrium-karbonát-oldatot adtunk hozzá és ezt a vizes elegyet előbb 10 ml, majd 5 ml kloroformmal extraháltuk. A kloroformos fázisokat egyesítettük és vízmentes nátriumszulfát-réteggel fedett vattán átszűrtük egy 25 ml-es mérőlombikba, 1,25 ml etanolt adtunk hozzá és kloroformmal feltöltöttük 25 ml térfogatra. Az így elkészített oldatokból 5—5 jxl-t alkalmaztunk egy-egy kromatográfiai vizsgálathoz. Az eredetileg (a bemért vinkanol súlyára számítva) 3,46% izovinkanolt tartalmazó, különböző pH-értékű oldatok szobahőmérsékleten történő 10 napi állás után az alábbi izovinkanol-tartalmat mutatták: Injekció pH-értéke Izovinkanol-tartalom %-ban 1,7 25,7 4.9 25,4 5.9 20,7 6.9 12,9 7.3 10,2 8.4 3,5 9,1 3,5 Amint az a táblázatból látható, a vinkanol farmakológiailag hatástalan izovinkanollá való átalakulása rendkívül nagymértékben függ az injekciós oldat pH-jától, s savas oldatban már szobahőmérsékleten is gyorsan végbemegy, s 25—27% izovinkanol keletkezése után egyensúlyi állapot áll be (az oldatok izovinkanol-koncentrációja még erősen savas oldatban és hosszabb tárolási idő után sem növekszik e határérték fölé). Megfelelően hatásos stabil injekciós oldat készítésének így alapfeltétele az alkalmas pH-tartomány kiválasztása, a találmány szerinti eljárással készített injekciós oldat izovinkanol tartalma még 12 hónapos szobahőmérsékleten történő tárolás után sem haladta meg a 4%-ot, ami figyelembe véve a kiindulási vinkanol alapanyag izovinkanol tartalmát (3,46%), a készítmény jó stabilitását bizonyítja. A vinkaminsav- illetőleg apovinkaminsav-észter-oldatok stabilitását fordított fázisú megoszlási kromatográfiás módszerrel vizsgáltuk. A mérést „Liquopump Model 312” szivattyúból és „Liquodet Model 308” változtatható hullámhosszú UV-detektorból összeállított nagynyomású folyadék - kromatográffal végeztük, „LiChrosorb RP-8” oszlop és eluensként acetonitril és 0,01 molos vizes ammónium-karbonát-oldat alkalmazásával, 280 nm detektálási hullámhosszal és 1 ml/perc áramlási sebességgel. A fent megadott összetételű, különböző pH-értékekre beállított oldószereleggyel készített, 5 mg/ml hatóanyag-tartalmú oldatokat közvetlenül, hígítás nélkül vittük fel az oszlopra; egy-egy méréshez 20 pl oldatot injektáltunk. A bomlástermékek kvantitatív meghatározásához olyan összehasonlító oldatot készítettünk, amely apovinkamint és vinkaminsav-etilésztert egyaránt tartalmazott, és az apovinkamintípusú szennyezéseket (apovinkaminsav, apovinkamin) apovinkaminban, a vinkamin-típusú szennyezéseket (epivinkamin, vinkaminsav, vinkaminsav-etilészter, vinkamon) pedig vinkaminsav-etilészterben fejeztük ki, így elkerülhető a két típusú szennyezés eltérő detektor-válaszából adódó hiba. Az összehasonlító oldat pontosan mért 1 mg apovinkamint és 1 mg vinkaminsav-etilésztert tartalmazott 100 ml acetonitrilben oldva. Ennek az oldatnak 20 pl-ét kromatografáltuk. Az 5 mg/ml apovinkaminsav-etilésztert tartalmazó, különböző pH-értékű oldatok különböző hőmérsékleten mutatott stabilitásának, illetőleg a hatóanyag bomlási sebességének az oldat pH-értékétől való függését az alábbi táblázat mutatja, a tárolás illetőleg hőkezelés során képződött bomlástermékek %-ban (a bemért hatóanyag-mennyiségre vonatkoztatva) megadott össz-mennyisége alapján: összes bomlási termék, %-ban: Hőkezelés pH=2,15 pH = 3,35 pH = 3,98 25 °C 0,51% 0 0 40 °C U2% 0,23% 0,13% 50’C 1 hónap 2,29% 0,59% 1,19% 60 °C 9,63% 1,55% 1,69% 100 "C 1 óra 0,32% 0 0,12% 100 °C 3 óra uo% 0,26% 0,24% 100 °C 5 óra 2,62% 0,42% 0,44% Amint a fenti táblázatból látható, a találmány szerinti összetételű és pH-értékű oldatok 25 °C hőmérsékleten 1 hónap alatt egyáltalán nem mutattak bomlást, sőt a bomlás még 40 °C-on is minimális mértékű volt, míg a 2,15 pH-értéken már igen számottevő bomlás következett be. 5,0 feletti pH-értéken az észterek hidrolízise már olyan mértékű, hogy az oldat tárolásra egyáltalán nem alkalmas. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás vinkaminsav-(rövidszénláncú)-alkilészterek vagy apovinkaminsav-(rövidszénláncú)-aIkilészterek vagy vinkanol gyógyászati célokra, főként parenterális beadásra alkalmas oldatainak előállítására, azzal jellemezve, hogy az oldat térfogatára számítva 2—10 mg/ml vinkaminsav(rövidszénláncú)-alkilésztert vagy apovinkaminsav-(rövidszénláncú)-alkilésztert vagy vinkanolt víz mellett 25—50 súly%, előnyösen 30—40 súly% propilénglikolt, glicerint vagy szobahőmérsékleten folyékony polietilénglikolt, vagy 40—60súly% etilénglikol-monometil- vagy monoetiléter, vagy 5—12 súly% szorbit vagy mannit, vagy az említett oldószerek valamelyikének fent megadott menynyiségét és 2—8 súly% etanolt tartalmazó és valamely gyógyászatilag elfogadható tompító eleggyel vagy 3—5 pK - értékű szerves savval vinkaminsav- vagy apovinkaminsavalkilészterek esetében 2,5 és 5,0 közötti, előnyösen 3,0 és 3,5 közötti, vinkanol esetében 7,5 és 9,5 közötti, előnyösen 8,0 és 8,5 közötti pH-értékre tompított oldószerelegyben oldunk, és kívánt esetben önmagukban ismert és injekciós készítményekben szokásos adalékokat, célszerűen konzerválószert, helyi érzéstelenítőszert és/vagy antioxidáns szert adunk az elegyhez. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként vinkanolt alkalmazunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként apovinkaminsavetilésztert alkalmazunk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
