181926. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kicsapott fehérjék elkülönítésére albumintartalmú szuszpenziókból
181926 segédanyagon áthaladt szűrlet a középső oszlopba folyik, ahonnan azt elszívatjuk és a 23 vezetéken és a 8 szelepen keresztül a szűrlet tartályba vezetjük. A szűrödéinek feszített fémszövettel vannak bevonva. A szűrőelemek lényegében a 21 üreges tengellyel összekapcsolt üreges tárolóteret alkotnak. A szűrési segédanyagot és a kicsapott globulinokat az egyes szűrési ciklusok között centrifugális leválasztással távolítjuk el a szűrőelemekről; 1%-os nátrium-klorid-oldattal végzett utánmosás után a szűrök ismét elő vannak készítve a következő riklushoz. A még nem szűrt kiindulási folyadékot a 24 iszaptartályban állandó keveréssel (3 keverőmű) szuszpendálva tartjuk. A kiindulási anyagot a 2 szivattyú segítségével a 10 szelepen keresztül két, 11 és 12 bevezető szeleppel tápláljuk a 20 szűrőtartályba. A szűrőtartályt az 5 szelepen keresztül sűrített levegővel helyezhetjük nyomás alá. A szűrőelemekre légköri nyomáson — 500 liter desztillált vízből és 1 kp Celite 545 néven kereskedelmi forgalomba hozott kovaföldből készített szuszpenzió segítségével — első (primer) feliszapolással kb. 0,2 cm vastagságú segédanyag szűrőréteget hordunk fel. Ezután 500 liter albumin-tartalmú szuszpenziót elkeverünk 25 kp Celite 545-tel. A keveréket a 24 iszaptartályból a szűrőtartályba tápláljuk és 2 bar túlnyomással átnyomatjuk a 22 elemek szűrőfelületein. A szűrt folyadéknak a tárolására szolgáló szűrlettartályba való ürítése előtt úgynevezett körfolyamat-eljárásban (6 visszavezető szelep, 2 szivattyú) az anyagot mindaddig ismételten átvezetjük a szűrőelemeken, amíg a 25 kémlelőablakon keresztül a szűrlet kielégítően tisztának nem látszik. Ezután a szűrletet a 8 szelepen keresztül a szűrlet-tartályba vezetjük. Amint a tisztított, albumin-tartalmú oldat elhagyja a szűrőt, egyidejűleg 1%-os, vizes konyhasó-oldatot szivattyúzunk át a szűrőn. Ennek az oldatnak a mennyisége a kiindulási anyag térfogatának mintegy a fele. Az átfolyt mennyiség óránként mintegy 150 liter. A szűrlet protein-koncentrációja az eljárás kezdetén kb. 2,5%, míg a végkoncentráció kb. 0,05%. A keletkező oldat tiszta, protein-koncentrációja kb. 1,5% (albumin), ozmolalitása pedig kb. 1000 mozm. A tiszta szűrletet ezután Millipore Pellicon kazettarendszeren (szűrőfelület kb. 0,9 m2, gyártó: Millipore GmbH, Neu-Isenburg, NSZK) dializálva, tehát dializáló membránon át szüljük mindaddig, amíg 25%-os, 100 és 200 mozm közötti ozmólitású protein-oldatot nem kapunk. Az átfolyási sebesség az eljárás kezdetén percenként kb. 5—6 liter szűrlet. A szűrőt az 1 meghajtó motor segítségével a szűrőelemek rotációjával és a zagynak a 9 kihordószelepen keresztül végzett eltávolításával tisztítjuk. A 4 szelepen keresztül a kihordott anyag kívánt esetben ismét feliszapolható és szűrhető A folyadék már egyetlen szűrés után sem mutatja a Tyndall-jelenséget és víztiszta. Gyakorlatilag mentes a kísérőanyagoktól, így lipidektől vagy idegen fehéijéktől. A folyadék közvetlenül szállítható az albumin-dúsításhoz és a leírt, ezt követő szűrési művelethez. Az albumin dúsítása önmagában ismert és azt például az említett 2 415 079 sz német szövetségi köztársaságbeli nyilvánosságrahozatal iratban ismertetik. Elvben és összesen tehát a következő lépéseket végezzük Plazma, 600 kg tartalmaz: 33,6 kg proteint, ebből 18,48 kg (=55 %) albu mint 1. +9% etil-alkohol, + 0,004 mól nátrium-kaprilát, + sósavoldat (a pH=6,5 beállításához) 7 2. Hőkicsapás: 30 perc, 68 °C, 3. + sósavoldat, pH=4,4 4. segédanyagos szűrés Szűrlet 5. dializáló szűrés (koncentrálás és dializálás), 6. +nátrium-hidroxid oldat, pH = 7,0 7. tisztára szűrés Albumin-oldat: 17,2 kg albumin-tartalommal (hatásfok: 93%). 8 2. példa Placenta-kivonatból oldószerekkel, így például triklórecetsawal, kloroformmal, dietil-éterrel először eltávolítjuk a jelenlevő hemoglobint. Ezt követően a fehérjetartalmú maradékot 6,5 pH-értéknél 68 °C-ra melegítjük. Lehűlés után a pH-t 0,5 n sósav-oldattal 4,4-re állítjuk be, majd a kapott folyadékból 100 litert elkeverünk 3 kp szűrési segédanyaggal (Hyflo—Super—Cel néven forgalomba hozott kovaföld-szűrési segédanyag). A folyadékot 18 °C hőmérsékleten és 4 bar nyomáson átnyomatjuk a már leírt 70 p lyukbőségű, segédanyagos szűrőn. Eszerint tehát első (primer) feliszapolás nélkül dolgozunk. A folyadékot mindaddig visszakeringtetjük, amíg az a kémlelőablakon nézve nem víztiszta és nem mentes a Tyndall-effektustól. Ezután a folyadékban levő albumint valamely önmagában ismert módszerrel a kívánt koncentrációra töményítjük. Az összes folyadékmennyiség átvezetése után a segédanyagos szűrőben található, a szűrési segédanyagon megkötött oldatot desztillált vízzel vagy 0,9%-os nátrium-klorid oldattal átmossuk. Az így kapott folyadék is víztiszta és még mintegy 0,5—20% albumint tartalmaz. Ezt ugyancsak közvetlenül bevezethetjük például a 2 415 079 sz. Német Szövetségi Köztársaság-beli nyilvánosságrahozatali iratban leírt albumin-dúsító eljárásba. Hangsúlyozni kívánjuk, hogy a segédanyagos szűrés első feliszapolással és anélkül is elvégezhető. A szürőelemek tisztítását rotációval és ellenkező irányú mosással, öblítéssel végezzük, amikoris a szűrőelemeket forgásba hozzuk és a maradékot zagyként távolítjuk el. Elegendő mennyiségű mosófolyadék felhasználásával (desztillált víz vagy nátrium-klorid oldat) a kitermelés elérheti a bevezetett albumin-mennyiség 96%-át. A más elkülönítő eljárásoknál, például a centrifugálási technikánál, különösen az elsőként leválasztott fehérjék eluálásánál kapott üledékanyagok — amelyek képződését az oldószer/szilárdanyag fajsúlyviszonyainak változása és az igen finom mechanikus eloszlás okozza —- a maradéktérfogat szűrésével elkerülhetők, miután a szűrőberendezést rotációval és ellenirányú mosással vagy körfolyamatos tisztítással megtisztítottuk. A hígított albuminoldat továbbfeldolgozása előtti szűrés az elért nagy tisztaság miatt elmaradhat. A szilárd anyagok leválasztása a hőmérséklettől független. A szűrési sebesség a hőmérséklet csökkenésével vagy emelkedésével csak kis mértékben változik és a változás elhanyagolható. A találmány szerinti eljárás foganatosításának szokásos módján a hőkezelt, pH = 4,4 értékre megsavanyított plazmát szobahőmérsékleten a külső köpenyében hűthető centrifugális tisztítású tárcsás szűrőberendezésben különítjük el. A szűrést más hőmérsékleten is végezhetjük. A tapasztalatok szerint 4—40 °C hőmérséklettartományban dolgozhatunk. A szűrési nyomás a csaknem teljesen nyomásmentes első feliszapolás után 4± 2,5 bar-ra emelhető. Az így 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
