181731. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 6-[D-2-D-2-amino-3-N-metil-karbamoil-propion-amido)-2-p-hidroxi-fenil acetamido]-penicillánsav tisztítására
3 181731 4-oxiddal végzett oszlopkromatográfiás tisztítás során a (C) és (D) szennyeződések eltávolíthatók ugyan a nyers N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillinből, ugyanakkor ezzel a módszerrel az (A), (B) és (E) szennyeződések nem választhatók el. Erős anioncserélő gyantákkal elválaszthatók a (B), (C) és (D) szennyeződések a nyers N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillinből, az (A) vagy (E) szennyeződés ugyanakkor nem távolítható el. A Sephadex vagy ioncserélő poliszacharidok alkalmazásával szintén nem választhatók el a szenynyeződések a nyers N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillinből. Ebben az esetben 1 g nyers N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillin tisztításához (mintegy 80%-os tisztaság) 400—600 ml adszorbenst kell használni. A találmány tárgya egyszerű és gyakorlatban alkalmazható eljárás az N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillin tisztítására. A találmány tárgya továbbá eljárás N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillin tisztítására, amelynek során nem poláros, makroporózus sztirol-divinilbenzol kopolimer adszorpciós gyantát alkalmazunk. A találmány tárgya továbbá eljárás az N’-metil-D-aszpariginil-amoxiciUin szintézise során keletkező illetve jelenlevő szennyeződések eltávolítására. A találmány tárgya ezen kívül olyan eljárás kidolgozása, amellyel egyszerű adszorpciós-elúciós módszerrel nagy tisztaságú N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin állítható elő nagy kitermeléssel. Az alábbiakban ezeket az eljárásokat részletesen ismertetjük. Az 1. ábra az 1-(A) példa szerint előállított nyers N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillin vizes oldatának nagy teljesítményű folyadékkromatogrammját ábrázolja. A 2. és 3. ábra a 6-(A) példa szerint előállított nyers N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillin nagy teljesítményű folyadékkromatogrammjait mutatja be. A találmányunk szerint a nyers N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillint a következő lépésekben tisztítjuk: (A) az N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillin vizes oldatát nem-poláros makroporózus sztirol-divinilbenzol kopolimer adszorpciós gyantával hozzuk érintkezésbe, és így az N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillint adszorbeáljuk a gyantán; (B) az adszorbeált N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillint vízzel vagy víznek és valamilyen vízzel elegyedő szerves oldószernek az elegyével eluáljuk; majd (C) a nyers N’-metil-D-aszparigjnil-amoxicillint izoláljuk az eluátumokból. A találmány szerint 0,6-1,1 ml/g pórustérfogatú nem-poláros, makroporózus sztirol-divinilbenzol kopolimer (divinilbenzollal térhálósított polisztirol) adszorpciós gyantákat alkalmazunk. A gyanták fajlagos felülete előnyösen 200—800m2/g, különösen 300-750 m2/g. Az alkalmazott nem-poláros, makroporózus gyanták szemcsemérete előnyösen 45— -840 ju, különösen 70-370 u, Ilyen kopolimerek például a következők: 0,890 ml/g pórustérfogatú, 501,3 m2/g fajlagos felületű és 280-370 p szemcseméretű sztirol-divinilbenzol kopolimer (gyártja Mitsubishi Chemical Industries Ltd., márkaneve Diaion HP-10); 1,077 ml/g pórustérfogatú, 718,0 m2/g fajlagos felületű és 280-370 p szemcseméretű sztirol-divinilbenzol kopolimer (gyártja Mitsubishi Chemical Industries Ltd., márkaneve Diaion HP-20); 2 0,990 ml/g pórustérfogatú, 570m2/g fajlagos felületű és 280—370 p szemcseméretű sztirol-divinilbenzol kopolimer (gyártja Mitsubishi Chemical Industries Ltd., márkaneve Diaion HP-30); 0,687 ml/g pórustérfogatú, 704,7 m2/g fajlagos felületű és 280-370 p szemcseméretű sztirol-divinilbenzol kopolimer (gyártja Mitsubishi Chemical Industries Ltd., márkaneve Diaion HP-40); 0,692 ml/g pórustérfogatú, 300 m2 /g fajlagos felületű és 280-840 p szemcseméretű sztirol-divinilbenzol kopolimer (gyártja Rohm and Haas Co., márkaneve Amberlite XAD-2); 0,998 ml/g pórustérfogatú, 200 m2/g fajlagos felületű és 280-840 p szemcseméretű sztirol-divinilbenzol kopolimer (gyártja Rohm and Haas Co., márkaneve Amberlite XAD-4). Az adszorpciós és eluációs lépéseket találmány szerint végezhetjük szakaszosan, de előnyösen folyamatosan oszlopban hajtjuk végre. A találmány szerinti adszorpciós lépést könnyen végrehajthatjuk úgy, hogy a nyers N’-metil-D- aszpariginil-amoxicillin vizes oldatát a nem-poláros, makroporózus sztirol-divinilbenzol kopolimer gyantával töltött oszlopon vezetjük át. A találmány szerint alkalmazott gyantát előzetesen vízben duzzasztjuk. Az alkalmazott gyanta térfogata a vizes oldatban levő N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillin koncentrációjától illetve az oszlopon átvezetett vizes oldat térfogatától függően széles határok között változhat. Általában a vizes oldatban jelenlevő N’-metil-D- aszpariginil-amoxicillin 1 g-jára számítva előnyösen 3-100 ml, különösen 30-80 ml gyantát használunk. A vizes oldatot a gyantán előnyösen 0,1—5 óra'1, különösen 0,3—2 óra"1 térsebességgel vezetjük át. Az adszorpciós lépést előnyösen 2-15 C hőmérsékleten, különösen 4—6 °C hőmérsékleten hajtjuk végre. Az adszorpciós lépésben előnyösen 0,5-26 súly/térf%, különösen 10-15 súly/térf.% N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillín tartalmú vizes oldatot alkalmazunk. A vizes oldatokat ismert ’módon például úgy állítjuk elő, hogy a nyers N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillint feloldjuk vízben és kívánt esetben az oldhatatlan anyagok eltávolítására aktív szénnel kezeljük vagy szűrjük. A találmány szerinti elúciós lépés könnyen végrehajtható vízzel vagy víznek és valamilyen vízzel elegyedő szerves oldószernek az elegyével. A gyantán adszorbeált N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillin eluálását úgy hajtjuk végre, hogy 0,3-15 óra"1, különösen 0,5-5 óra'1 térsebességgel vizet vagy víznek és valamilyen vízzel nem elegyedő szerves oldószernek az elegyét vezetjük át az oszlopon. Ebben az esetben először az (A) [vagy (E)] és (B) szennyeződések kerülnek először az eluátumba, még az N’-metil-D-aszpariginil-amoxicillin deszorpciója előtt, majd vízzel történő eluálással fokozatosan eluáljuk az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillint. így a kívánt terméket tartalmazó eluátumok illetve frakciók összegyűjtésével tiszta N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin-oldatot kapunk. Az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillint tartalmazó eluátumok illetve frakciók könnyen megkülönböztethetők a szennyeződéseket tartalmazó eluátumoktól illetve frakcióktól, mivel az eluátumokban jelenlevő N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin 272 nm-en végzett ultraibolya abszorpcióval kimutatható. A leírásunk elején említett 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 55
