181686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-alkilezett szteroid-származékok előállítására
11 181686 12 A kapott eredményeket, szubkután injekált 1 jLtg/kg aldoszteron-monoacetát aktivitásának százalékos gátlásában, a nátriumkoncentráció káliumkoncentráció arány logaritmikus függvényében, KAGAWA Endocrinology 1960, 67, 125—132, módszere szerint fejeztük ki. Eredmények a következők: Orálisan adagolt termék Gátlás dózisa % A termék 2 mg/kg 47% C termék 2 mg/kg 27% Eredmény: 2 mg/kg orális dózisnál az A termék sokkal aktívabb mint a C termát. 2. B termék Az 1. körülményei között a B termék 0,4 mg/kg dózissal 58%-os gátlást eredményez. Következésképp, a B termék igen jó antialdoszteron-aktivitással rendelkezik. II An drogén-aktivitás 1, A és C termék Az A és C termék androgén-aktivitását J. P. RAYNAUD és munkatársai a „J. Ster. Biochem” 1975, 615-622 oldalon leírt hormonális-receptor módszerével végeztük. A módszer a következő: 24 órával előbb kasztrált hím patkányokból eltávolított prosztatamirigyet 10 mmól trometamin, 0,25 M szacharóz és sósav pH = 7,4 pufferban homogenizáltunk. A homogenizátumot 1 óra hosszat 105 000 g-vel centrifugáltuk. A felső folyadékot, vagyis a „citozol”-t ezután beállítottuk ügy, hogy 1/5 hígítású (súly/térfogat) legyen. A citozolt 0 °C hőmérsékleten 2 óra hosszat adott koncentrációjú trídumozott 17jS-hidroxi-17/3- metil-ösztra-4,9,ll-trién-3-onnal, a következőkben trlciumozott R termék, inkubáltuk növekvő koncentrációjú azonos, de nem trídumozott hideg termék, a következőkben hideg R termék, tesztoszteron, vagy teszttermék jelenlétében, vagy anélkül. Két óra után a receptorhoz kötött trídumozott termék radioaktivitását szén-dextrán (1,25%—0,625%) abszorpciós technikával meghatároztuk. Az adatokat ábrázoltuk:- a görbék a megkötött trídumozott R termék százalékban kifejezett értékét a hozzáadott hideg R termék, a tesztoszteron-, illetve a teszttermék-koncentrációk logaritmusának függvényében ábrázolják; — meghúztuk az abszcissza tengellyel párhuzamos Iso egyenest. g B/T max + B/T min. T= 2 B/T max a megkötött triciumozott R termék százaléka, ha terméket nem adtunk hozzá. B/T min a megkötött trlciumozott R termék százaléka, ha maximális mennyiségű hideg R terméket adtunk hozzá. Az I5 o egyenes és a görbék metszéspontjai meghatározzák a CT és CX értékeket. CT: a hideg tesztoszteron koncentrációja, mely a trídumozott R termék megkötését 50%-kal gátolja. CX: a teszttermék koncentrációja, mely a triciumozott R termék megkötését 50%-kal gátolja. A tesztelt termék relatív aktivitását (RLA) a következő képlet adja meg: CT RLA=100 X—— Eredmények a következők: Termékek RLA tesztoszteron 100 A termék 0,4 C termék 28 Eredmény: az A termék gyakorlatilag megakadályozza a tesztoszteron prosztata-receptorhoz való affinitását, míg a Q terméknél észrevehető affinitás mutatkozik. 2. B termék Az 1. pontban leírt azonos körülmények között a B termék RLA = 0,2 értéket ad. A B termék így, a tesztoszteron prosztata-receptorhoz való affinitására még kevesebb értéket mutat, mint az A termék. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az (I) általános képletű 7-alkilezett szteroid-származékok előállítására, a képletben R jelentése a- vagy /3-helyzetű, 2-6 szénatomszámú alkil-, 2—6 szénatomszámú alkenilvagy fenil-(l—4 szénatomos) alkil-csoport, X és Y jelentése vagy (A) képletű csoport, vagy X jelentése hidroxilcsoport, és Y jelentése (B) általános képletű csoport, melyben M jelentése hidrogénatom, alkálifématom vagy ammóniumcsoport, azzal jellemezve, hogy a (II) képletű vegyületet valamely (III) általános képletű vegyülettel, a képletben R jelentése az előbbiekben megadott és Hal jelentése halogénatom, valamely réz(I)-só jelenlétében, vagy egy (IV) általános képletű rézvegyülettel - a képletben R jelentése az előbbiekben megadott - reagáltatjuk, majd a terméket valamely savval kezeljük, ezután a la- és 70-izomerkeverék formájában kapott (IA) általános képletű vegyidet izomeijeit kívánt esetben elválasztjuk, ezután kívánt esetben, az izomereket külön-külön, vagy ezek elegyét alkálifém-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 55 6
