181684. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens a kreatinkináz mb meghatározására

181684

8

Táblázat

Enzimaktivitás %-os gátlása-------------------------------------------------------------------— 5

Enzimaktivitás %-os gátlása CK-MM (600-1000 CK-MB (200-400 egység/liter) egység/liter)

Állat

száma —----------------------------------------------------------------------iO

Kiindulási FAB-frag- Kiindu- FAB- szérum mensek lási frag(plazma) szérum mensek

1

99,5

99,5

62

52

2

99,6

99,7

56

53

3

99,3

99,1

64

49

4

98,5

99,3

68

52

3. példa

CK-MB-meghatározás Szász et al. szerint [Clin. Chem. 22 650 és ezt követő oldalak, (1976)].

Reagensoldat:

diadenozin-pentafoszfát

NADP

kreatin-foszfát

hexokináz

glükóz-6-foszfát--dehidrogenáz

N-acetil-cisztein

imidazol-puffer

glükóz

magnézi um-acetát

10.0 pmól/liter

2.0 millimól/liter

30.0 millimól/liter

3.0 U/ml

2.0 U/ml

20.0 millimól/liter 0,1 mól/liter (pH = 6—7)

20.0 millimól/liter

10.0 millimól/liter

egy küvettába pipettázunk:

2,5 ml reagensoldatot,

0,1 ml antitest-oldatot (a 2c. példa szerint) 0,1 ml szérum-mintát.

hullámhossz: 365 nm

rétegvastagság: 10 mm

hőmérséklet: 25 °C

Mérési érték:

A E/min =0,007

megfelel

illetve

52 U/liter CK-B-nek, 104 U/liter CK-MB-nek.

ADP

2,0 millimól/liter

(végkoncentráció

a tesztben)

AMP

5,0 millimól/liter

4. példa

30

CK-MB-meghatározás luciferin-luciferázzal

Oldatok

Töménység az oldatban

Töménység a tesztben

1. oldat

EDTA (etilén-diamin -tetraacetát)

4 millimól/liter

2 millimól/liter

magn ézium-acetát

20 millimól/liter

10 millimól/liter

D-luciferin

70 pmól/liter

35 pmól/liter

luciferáz

400 egység/ml

400 egység/teszt

RSA (marhaszérum-albumin)

2 g/liter

0,1%

imidazol-acetát, pH = 6,7

110 millimól/liter

100 millimól/liter

2. oldat

AMP

33 millimól/liter

10 millimól/liter

N-acetil-cisztein (NAC)

33 millimól/liter

10 millimól/liter

ApsA

33 /rmól/liter

10 pmól/liter

ADP

3,3 millimól/liter

1 millimól/liter

imidazol-acetát, pH = 6,7

110 millimól/liter

100 millimól/liter

3. oldat

kreatin-foszfát

300 millimól/liter

30 millimól/liter

imidazol-acetát

110 millimól/liter

100 millimól/liter

4. oldat

ATP

5 x 10 4 mól/liter

5 x 10 6 mól/liter

4