181659. lajstromszámú szabadalom • Fémszol-részecskével jelzett immuno-vizsgálati módszer
23 181659 24 (pH 6,0—6,5), ami ezen kívül még a 6.2. pont szerint előállított, 1 mg/1 koncentrációjú anti-HCG-t is tartalmazott. A konjugátot 3-szor mossuk centrifugálással 80 000 N/kg értéken oly módon, hogy a szupernatánst mindig eldobjuk és a szemcsét újradiszpergáljuk 0,2 mol/l K2CO3-0t tartalmazó oldat néhány cseppjével 8,5-es pH-értékre állított, 5 mmol/l-es koncentrációjú NaCl-oldat 10 ml-ével. A 3. mosás után a mosott konjugátot ugyanebben a közegben tároljuk 2—8 °C-on. 12.3. HCG meghatározása TRIS-szel pufferolt és Ai5QTMm=2,0 értékű konjugátot készítünk oly módon, hogy a tárolt konjugátot TRIS/ HC1 puffer 0,1 mol/l koncentrációjú, 10 g/1 NaCl-ot, 1 g/1 BSA-t és 4 g/16000-es molekulasúlyú polietilén-glikolt tartalmazó, 7,4-es pH-értékű oldatával hígítjuk. A TRIS-szel pufferolt konjugát 400 pl-ét összekeverjük TRIS-puffer 100 /il-ével, vagy 2000 IU/1 HCG-t is tartalmazó TRIS-puffer 100 /tl-ével. 24 órás inkubálási idő után a HCG-t nem tartalmazó reakcióelegy Ai5c0mRmértéke 1,75 és 1,90 között változott. A HCG-t is tartalmazó reakciós elegy A/5c0mnm-értéke pedig 0,75 és 1,00 között mozgott. XIII. példa Cr203-szol részecskét alkalmazó HCG-agglutinácíós teszt 13.1. Cr2Oj-szol részecskék készítése Cr203-szolt oly módon állítunk elő, hogy 0,40 mmol/1 koncentrációjú CrK(S04)2-oldatot 21 órán át 75 °C-on tartunk. Szobahőmérsékletre történő lehűtés után a szol 100 ml-nyi részét centrifugáljuk 60 000 N/kg értéken 1 órán keresztül. 13.2. Az anti-HCG kapcsolása a Cr203-szol részecskékhez A szupernatánst eldobjuk és a szemcsét újradiszpergáljuk 5 mmol/l-es NaCl oldat 10 ml-ében (pH 5,8— 6,2), ami ezen kívül még a 6.2. pont szerint előállított, 1 mg/1 koncentrációjú nyúl anti-HCG-t is tartalmaz. Egy éjszakán át tartó inkubálás után a konjugátot háromszor mossuk centrifugálással 60 000 N/kg értéken, úgy, hogy a szupernatánst mindig eldobjuk és a szemcsét újra diszpergáljuk 5 mmol/1 NaCl-ot és 0,1 g/l BSA-t tartalmazó, továbbá 0,2 mol/l K2C03-al 7,4-es pH-értékre állított oldatban. A 3. mosás után a mosott konjugátot 2—8 °C-on tároljuk. 13.3. HCG meghatározása TRIS-szel pufferolt és A40c0mnm=2,0 értékű konjugátot készítünk oly módon, hogy a tárolt konjugátot TRIS/ HCl puffer 0,1 mol/l koncentrációjú, 10 g/1 NaCl-ot, 1 g/l BSA-t és 2,5 g/1 6000-es molekulasúlyú polietilén-glikolt tartalmazó, 7,4-es pH-értékű oldatával hígítjuk. A TRIS-szel pufferolt konjugát 400 /xl-ét összekeverjük TRIS-puffer 100 /rl-ével, vagy 4000 IU/1 HCG-t is tartalmazó TRIS-puffer 100 ftl-ével. 24 órás inkubálási idő után a HCG-t nem tartalmazó reakcióelegy A^mnmértéke 1,50 és 1,70 között változott. A HCG-t is tartalmazó reakcióelegy Aj0c0mnm-crtékc pedig 0,90 és 1,25 között mozgott. XIV. példa Ti02-szoI részecskét alkalmazó HCG- agglutinációs teszt 14.1. Ti02-szol részecskék készítése Ti02-szolt oly módon állítunk elő, hogy egy 100 mmol/1 TiCl4-ot, 190 mmol/1 Na2S04-ot és 5,7 mol/l HCl-ot tartalmazó oldatot 2 napon keresztül 98 °C-on tartunk. Szobahőmérsékletre történő lehűtés után a 100 ml-nyi szolt centrifugáljuk 50 000 N/kg értéken egy órán keresztül, 14.2. \z anti-HCG kapcsolása a Ti02-szol észecskékhez A szupernatánst eldobjuk és a szemcsét diszpergáljuk 10 mmol/1 HCl-ot tartalmazó vizes oldat 10 ml-ében, majd ismét centrifugáljuk 50 000 N/kg értéken 1 órán át. A szupernatánst eldobjuk és a szemcsét újra diszpergáljuk 10 ml desztillált vízben. 5,5—5,8-as pH-értékre állított, 15 mmol/1 NaCl-ot és a 6.2. pont szerint előállított nyúl anti-HCG-t 0,5 mg/l koncentrációban tartalmazó oldat 5 ml/-ét hozzáadjuk a diszpergált és mosott szol 10 ml-éhez, majd egy éjszakán át szobahőmérsékleten inkubáljuk. A konjugátot 3-szor mossuk centrifugálással 50 000 N/kg értéken 1 órán át, oly módon, hogy a szupernatánst mindig eldobjuk, a konjugátot pedig újradiszpergáljuk 0,2 mol/l K2C03 oldattal, 7,4-es pH-ra állított, 5 mmol/1 NaCl-ot és 0,1 g/1 BSA-t tartalmazó oldat 10 ml-ében. A 3. mosás után a konjugátot 2— 8 °C-on tároljuk. 14.3. HCG meghatározása TRIS-szel pufferolt és A40cTMnm=2,0 értékű konjugátot készítünk oly módon, hogy a tárolt konjugátot TRIS/ HC1 puffer 0,1 mol/l koncentrációjú, 10 g/1 NaCl-ot, 1 g/1 BSA-t és 2,5 g/l 6000-es molekulasúlyú polietilén-glikolt tartalmazó, 7,4-es pH-értékű oldatával hígítjuk. A TRIS- szel pufferolt konjugát 400 p 1-ét összekeverjük TRIS- puffer 100 /il-ével, vagy 2000 IU/1 HCG-t is tartalmazó TRIS-puffer 100 /d-ével. 24 órás inkubálási idő után a HCG-t nem tartalmazó reakcióelegy A40c0mnm-értéke 1,40 és 1,25 között változott. A HCG-t is tartalmazó reakcióelegy A’4(£|mnm-értéke 0,75 és 0,90 között mozgott. XV. példa Polimer bevonatú arany-részecskéket alkalmazó HPL-teszt 15.1. Arany-szol részecskék készítése 60 ura közepes átmérőjű arany-szol részecskéket az 1.1. pont szerinti eljárás szerint állítunk elő. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 12
