181497. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kristályos oxiimino-7amino-tiazolil-acetamido-3-acetoximetil-cef-3-ém-4 karbonsav-nátriumsó új, D-kristályos alakban való előállítására
11 181497 12 Az előző példa szerinti módon járunk el a műveleteket az aktív szenes derítésig folytatva. Az ekkor kapott szűrletet szobahőmérsékleten, keverés közben két óra alatt hozzácsepegtetjük 80 ml izopropanolhoz. A rendszert két órán át keverjük szobahőmérsékleten, azután két órán át 0 °C hőmérsékleten, majd a kristályokat vákuumszűrőn kiszűrjük, etanollal mossuk és erős vákuumban megszárítjuk. 8,80 g kívánt terméket kapunk. Víztartalma 0,74% 12. példa A 3-acetoximetil-7-[2-(2-amino-4-tiazolil)-2-metoxiimino-acetamído]-cef-3-em-4-karbonsav szín izomer nátriumsó előállítása D kristály-alakban 3,5 g nátriumacetát 5 ml vízzel és 300 ml etanollal készített oldatához szobahőmérsékleten hozzáadunk 10 g 3-acetoximetil-7-[2-(2-amino-4-tiazolil)-2-metoxiimino-acetamido]-cef-3-em-4-karbonsav-formiát szín izomert. Az oldódás befejeződése után az oldatot szűrjük, és a szűrletet szobahőmérsékleten, keverés közben 1 óra alatt hozzácsepegtetjük 160 ml abszolút etanolhoz. A keverést 3 órán át folytatjuk szobahőmérsékleten, azután 16 órán át 0 °C-on tartjuk a szuszpenziót. Ezután a kristályos anyagot vákuumszürőn kiszűrjük, etanollal mossuk és erős vákuumban megszárítjuk. 7,75 g kívánt terméket kapunk. Víztartalma 0,95% A kiindulási vegyületként használt hangyasavas szolvát ismertetése a 850 662 számú belga szabadalmi leírásban található. 13. példa Injekciót készítünk az alábbi összetétellel: D kristály-alakú 3-acetoximetil-7-[2-(2- -amino-4-tiazolil)-2-metoxiimino-acetamido]-cef-3-em-4-karbonsav szín izomer nátriumsó 500 mg steril vizes vivőanyag q.s. 5 ml Zselatin kapszulát készítünk az alábbi összetétellel: D kristály-alakú 3-acetoximetil-7-[2-(2- amino-4-tiazolil)-2-metoxiimino-acetamido]-cef-3-em-4-karbonsav szín izomer nátriumsó 250 mg zselatin kapszulához szükséges vivőanyag q.s. 400 mg * A találmány szerinti eljárással előállított vegyület farmakológiái sajátságait az alábbi kísérletekben vizsgáltuk. In vitro hatás vizsgálata Ezt a vizsgálatot az úgynevezett folyadék-hígításos módszerrel végeztük. Egy sorozat kémcsőbe azonos mennyiségű steril tápközeget mértünk be. A vizsgálandó vegyület egyre növekvő mennyiségét helyeztük el a kémcsövekben, azután minden kémcsövet inokuláltunk egy baktériumtörzzsel. A tenyészeteket 24 órán át, illetve 48 órán át inkubáljuk 37 °C hőmérsékleten, azután átvilágítással kiértékeljük a baktériumok növekedésének gátlását. Ezzel a módszerrel határoztuk meg a minimális gátiási koncentrációt (MIC), amelyet mikrogramm/ml-ben kifejezve adunk meg az 1. táblázatban. A stabilitás vizsgálata Az 1. példa szerinti terméket nem steril levegőt tartalmazó palackban helyeztük el, és a palackot gumidugóval lezártuk. Időközönként megvizsgáltuk a megmaradt aktivitást. Vizsgálataink eredményét az alábbi táblázatban foglaljuk össze. 80 *C 50 °C Idő: 0 160 óra 2 hét 1,5 hónap 3 hónap 97 89,5 81,5 92,5 92 1. táblázat Baktérium törzs 1. példa szerinti tennék 24 óra M.I.C. (ng/ml) 48 óra Staphylococcus aureus I H 005 2 3 Staphylococcus aureus I H 38 1 2 Staphylococcus aureus I H 41 1 2 Staphylococcus aureus I H 47 2 2 Escherichia Coli 7881 0,1 0,1 Escherichia Coli T 55 4376 0,1 0,1 Escherichia Coli T 55 4076 0,05 0,05 Escherichia Coli A 223 0,1 0,1 Klebsiella Pneumoniae COc 229 0,1 0,1 Klebsiella Pneumoniae COc 238 0,2 0,2 Proteus Mirabilis 3477 0,05 0,05 Proteus Mirabilis 1816 0,05 0,05 Proteus Mirabilis 9048 0,02 0,02 Proteus Vulgaris Co 1 0,2 0,4 Proteus Vulgaris Co 4 0,6 0,6 Proteus Vulgaris Du 27 0,02 0,02 Salmonella typhimurium 6478 0,1 0,1 Az alábbiakban közöljük azoknak a vizsgálatoknak az eredményeit, amelyekkel a 850 662 számú belga szabadalmi leírás szerint előállított és a találmány szerinti eljárással előállított III képletű vegyületek stabilitását vizsgáltuk. Az A vegyület a 850 662 számú belga szabadalmi leírás 24. példája szerint előállított kristályos 3-acetoximetil-7-[2-(2- -amino-4-tiazolil)-2-metoxiimino-acetamido]-cef-3-em-4- -karbonsavas nátriumsó szín izomere. A B vegyület az előbbi vegyület amorf alakban, amint azt a 850 662 számú belga szabadalmi leírás 25. példája szerint előállítottuk. A C vegyület a 3-acetoximetil-7-[2-(2-amino-4-tiazolil)-2- -metoxiimino-acetamido]-cef-3-em-4-karbonsavas nátriumsó szín izomere, amelyet a 850 662 számú belga szabadalmi leírás 26. példája szerint állítottunk elő. Az X vegyület a 3-acetoximetil-7-[2-(2-amino-4-tiazolil)- 2-metoxiimino-acetamido]-cef-3-em-4-karbonsavas nátriumsó szín izomerének a találmány szerinti eljárással előállított D kristályos alakja. E vegyületek stabilitását úgy vizsgáltuk, hogy a mintákat 60 °C hőmérsékleten tároltuk 1 hónapig nem-steril levegőt tartalmazó, gumidugóval lezárt edényekben. A tárolás után a termék összetételét az A, B és C vegyületek esetében vékonyrétegkromatográfiával, az X vegyület esetében pedig nagynyomású kromatográfiával határoztuk meg. A bomlatlanul megmaradt vegyület mennyiségét százalékosan határoztuk meg egy olyan mintához viszonyítva, amelyet -20°C-on tároltunk 1 hónapig. Eredményeinket az alábbi táblázatban foglaljuk össze: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
