181238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a di-O-(n-hosszúszénlánú-alkil-vagy-alkenil)-propándiolok amin-származékának előállítására
13 181238 14 4. táblázat Az interferon forrása Interferon koncentráció (E/ml) 6 Az injekció utáni óraszám 8 9 12 15 18 plazma 20 70a 70 100 120 100 peritoneális 10 mosófolyadék 13 — 109 284 312 224 14-17. példa 15 Az l-[2,3-di-0-(n-hexadecil)-oxi-propil-4-amino-metil-4-fenil-piperidin-dihidrogénklorid növeli a poliinozinsav-policitidilsav [poli(I : C)] indukált vírusfertőzéssel szembeni sejtrezisztenciát 20 Eagle minimál táptalaj lOOml-ét 2 ml 100-szorosan koncentrált antibiotikum-antifungális oldattal, 1 ml 200 mM-os glutamin-oldattal és 5%, hővel inaktivált borjú-szérummal kiegészítve növekedési táptalajt készítünk. Ebbe a táptalajba egér L-929 fibro- 25 plaszt sejteket szuszpendálunk, és egy 96 helyes mikrotiter lemez mindegyik lyukába 0,2 ml, 20.000-30.000 sejtet tartalmazó szuszpenziót helyezünk. 2-4 napon át 37 °C hőmérsékleten és 5% széndioxid-atmoszférában inkubálva a tenyészeteket, 30 egyrétegű sejttenyészetet hozunk létre. Foszfát puffert tartalmazó sóoldatta] mossuk a lemezeket közvetlenül a kezelés után. A fenti táptalajban, amely azonban borjú-szérumot nem tartalmaz, milliliterenként 5,0, 1.0, 0,2 és 35 0,04 mg polí(I : C)-t oldunk. Mindegyik hígításból 0,1 ml-t nem szabályos elrendezésben rácseppentünk az L—929 sejtrétegre, majd rácseppentünk 0,1 ml-t az L—929 sejtrétegre a fenti szérum-mentes táptalaj milliliterében 20,0, 4,0, 0,8, 0,16 és 0,032 jag-ot tar- 40 talmazó hatóanyagból is. A kontroll lyukakba vagy poli(I : C)-t, vagy egyedül a hatóanyagot helyezzük. 6 órán át 37 °C hőmérsékleten és 5% széndioxidot tartalmazó atmoszférán inkubáljuk a lemezeket, majd ezt követően négy esetben foszfát-puffért tar- 45 talmazó sóoldattal mossuk, amiután 0,1 ml 2% szérumot tartalmazó növekedési táptalajjal töltjük meg a lyukakat. További 18 órán át folytatjuk az inkubációt, majd megvizsgáljuk a sejtek toxicitási tüneteit. Ezután lyukanként 0,1 ml vezikuláris szto- 50 matitisz vírus-szuszpenzióval (VSV) fertőzzük a tenyészeteket, az adagolt vírus-szuszpenzió a TCIDS 0- -érték (50%-os szöveti fertőzést okozó mennyiség) 10—30-szorosának megfelelő vírust tartalmaz. 3—4 napon át inkubáljuk a tenyészeteket, majd a citopa- 55 togenitást mikroszkopikusan vizsgáljuk. A virusfertőzéstől megvédett sejteken citopatogén hatást nem találunk. A minimális védő dózist (MPD) a poli(I : C) mutatja. A példa szerinti vegyülettel együtt vizsgált sejtekben növekszik vagy nagyobbodik a vírusellenes hatás, ezt mindegyik hígításra megállapítjuk. A példában megadott vizsgálattal meghatározzuk az 1—4. példában előállított vegyületek poli(I : C)-indukált sejt-rezisztencia-növelő hatását vírusfertőzéssel szemben. 5. táblázat A poli (I : C) hatásának A példa Az adott példánövelése száma ban előállított ---------------------------------vegyidet Koncentráció (jig/ml) 20 0,4 0,8 14. 1 + 4-± 15. 2 4-4-— 16. 3-1-4-± 17. 4 ±(a) 4- = > 5-szörös növekedés, ± = ~ 5-szörös növekedés, == < 5-szörös növekedés. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az 1 általános képletű vegyületek és ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható savaddíciós sóinak előállítására, ahol az általános képletben Rí és R2 12—20 szénatomos normál alkil-, vagy 16-20 szénatomos, az 1-helyzetben kettős kötést nem tartalmazó normál alkenilcsoport, azzal jellemezve, hogy egy II általános képletű vegyületet — ahol R] és R2 jelentése a fenti — valamely komplex alkálifémhidriddel redukálunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja olyan I általános képletű vegyületek előállítására, ahol R, és Rí 14—18 szénatomos normál alkilcsoport, azzal jellemezve, hogy olyan II általános képletű vegyületekből indulunk ki, ahol R, és R2 a fent megadott. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, olyan I általános képletű vegyületek előállítására, ahol Rí és R2 n-hexadecil-csoport, azzal jellemezve, hogy olyan II általános képletű vegyületekből indulunk ki, ahol Rj és R2 a fent megadott. 4. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, olyan I általános képletű vegyületek előállítására, ahol Rj és R2 n-oktadecil-csoport, azzal jellemezve, hogy olyan II általános képletű vegyületekből indulunk ki, ahol R, és R2 a fent megadott. 1 lap képletekkel A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 84.4288 - Zrínyi Nyomda, Budapest 7
