181177. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-glutaminsavat és L-aszparaginsavat tartalmazó, szinergetikus hatású készítmények előállítására
9 181177 10 etanol jelenlétében határoztuk meg, míg a védőhatás vizsgálata során az inkubációs közeghez 2,5 térfoga t% etanolt és a következő hatóanyagokat, illetve hatóanyag-keverékeket adtuk: a) l-glutaminsav K-só 30 /rmól b) L-aszparaginsav K-só 30 jumól c) L-aszparaginsav K-só + L-glutaminsav K-só (1 : 1) 15 + 15 /rmól d) L-aszparaginsav K-só + L-glutaminsav K-só (2 : 1) 20 + 10 pmól e) L-aszparaginsav K-só + L-glutaminsav K-só (1 : 2) 10 ♦ 20 /anól 5 Az észlelt eredményeket a IV. táblázatban közöljük. III. táblázat Vizsgálat Mg2+ számérték ATPaz-akt. % K+-Na+ számérték ATPaz-akt. % Alapérték 5,43 ± 1,1 100,0 48,2 ±3,1 100,0 Etanol 3,13 ± 0,9 57,6 19,3 ±2,4 40,0 Etanol + a) 3,76 + 1,1 62,2 21,4 ± 1,9 44,3 Etanol + b) 3,32 ±0,7 61,1 20,5 ± 2,2 42,5 Etanol + c) 4,03 ± 1,3 74,2 26,4 ± 0,9 54,7 Etanol + d) 4,94 ± 1,5 90,9 39,8 ± 3,2 82,5 Etanol + e) 5,02 ± 1,8 92,4 41,8 ± 1,6 86,7 IV. táblázat Vizsgálat AChE-aktivitás Gátlás, % Alapérték 25,8 ± 3,3 — Etanol 19,1 ± 1,7-25,97 Etanol + a) 21,2 ± 2,2-17,82 Etanol + b) 20,9 ± 1,4-19,00 Etanol + c) 22,9 ± 0,9-11,24 Etanol + d) 26,9 ± 2,3 + 4,26 Etanol + e) 28,7 ± 1,7 +11,24 A III. és IV. táblázat adataiból a következőket állapíthatjuk meg: A vizsgált körülmények között sem az L-glutaminsav, sem az L-aszparaginsav önmagában nem rendelkezik számottevő védőhatással. A 40 két aminosav 1 :1 mólarányú keveréke ugyan az önmagukban adagolt aminosavakénál nagyobb mértékű védőhatást fejt ki, az elért védelem azonban távolról sem elegendő az ATPaz-aktivitás, illetve az acetflkolin-észteráz aktivitás normalizálásához. Ez- 4^ zel szemben a két aminosav 1 :2, illetve 2 :1 mólarányú keverékével az ATPaz-aktivitás jó közelítéssel a normális értékre állítható vissza, az acetilkolin-észteráz aktivitás pedig a normális értékhez viszonyítva is növelhető. A kísérleti adatok azt igazolják, hogy a 50 két aminosav 1:2, illetvé 2 :1 mólarányú keveréke lényegesen jobb eredménnyel alkalmazható az alkoholos intoxikáció megszüntetésére, valamint az alkoholos intoxikációhoz hasonló klinikai tünetekkel járó rendellenességek (például hepatikus kóma) nor- 55 malizálására, mint az egyedileg adagolt aminosavak, illetve azok 1 :1 mólarányú keveréke. 2. Ammónia-intoxikációban és alkalózisban kifejtett hatás vizsgálata in vivo körülmények között 60 A vizsgálatokat 150—200 g testsúlyú hím albínó patkányokon végeztük. A patkányoknak az ammónia-intoxikáció előidézése során 7,9 mmól/kg ammónium-acetátot, az alkalózis előidézése során 7,9 mmól/kg 65 nátrium-acetátot adtunk be intraperitoneális injekció formájában, 1,0 ml fiziológiás konyhasó-oldatban oldva. Az egészséges kontroli-csoportba tartozó állatoknak csak 1,0 ml fiziológiás konyhasó-oldatot adtunk be. Az ammónium-acetát, illetve nátrium-acetát beadása után 5-7 perccel az állatok prekómás állapotba kerültek; a kóma az ammónium-acetát, illetve nátrium-acetát beadása után 10-20 perccel lépett fel. Ekkor az állatokat leöltük, és az állatok agyát elkülönítettük. Az agy acetilkolin-tartalmát Fellman módszerével [J. Neurochem. 16, 1315 (1969)], szerotonin-tartalmát Snyder és munkatársai módszerével [Biochem. Pharmacol. 14, 831 (1965)], acetilkolin-észteráz aktivitását Ellman és munkatársai módszerével [Biochem. Pharmacol. 7, 88 (1961)], NH^ -tartalmát pedig enzimatikus úton, UV fényben végzett méréssel (Test No. D.297012, SKI Chemie Linz A.G., Zürich, Svájc) határoztuk meg. Az aminosavak, illetve aminosav-keverékek biológiai hatásának vizsgálata során az állatoknak az ammónium-acetát, illetve nátrium-acetát beadásával egyidőben a következő hatóanyagokat, illetve hatóanyag-keverékeket adtuk be: a) L-glutaminsav K-só 300 mg/kg b) L-aszparaginsav K-só 300 mg/kg c) L-aszparaginsav K-só + L-glutaminsav K-só (1 : 1) 150 + 150 mg/kg d) L-aszparaginsav K-só + L-glutaminsav K-só (2 : 1) 200 + 100 mg/kg e) L-aszparaginsav K-só + L-glutaminsav K-só (1:2) 100 + 200 mg/kg Az állatokat ugyanannyi idővel a kezelés után öltük le, mint az aminosavakkal nem kezelt, prekómás vagy kómás állapotban levő patkányokat, és a korábbiakban ismertetett módszerekkel meghatároztuk az állatok agyának acetilkolin-, szerotonin- és NH4 ^-tartalmát, valamint acetilkolin-észteráz aktivitását. Az eredményeket az V-XI. táblázatban foglaljuk össze. 5
