181089. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens enzimszubsztrátok enzimatikus meghatározására
7 181089 8 Keverés után 20-25 °C-on inkubáljuk, majd 25-50 perc múlva mérjük a minta extinkcióját (E minta) és a standard extinkcióját (Estandard) a vakpróbával szemben. A mintában lévő glükózkoncentráció számítása: ^minta c = 100 X --------------[mg/100 ml] ^standard Mérési eredmények: Glükóz standard-sorozat (50—400 mg/100 ml) Extinkció a reagensekben Glükózkoncentráció A B 50 mg/100 ml — 0,095 100 mg/100 ml 0,060 0,170 200 mg/100 ml 0,236 0,353 300 mg/100 ml 0,400 0,533 400 mg/100 ml 0,577 0,700 A fenti mérési eredményeket a mellékelt ábrán grafikusan ábrázoljuk. Az A oldatra kapott görbe azt mutatja, hogy a 70mg/100ml glükózkoncentráció alatt a mintafolyadékok nem mérhetők, mivel 5 nincs extinkció, azaz nem történik színképződés. Az általánosan szokásos egypont-standard (például 100 mg glükóz/100 ml) használatakor a 70 és 100 mg/100 ml közötti glükózkoncentrációjú mintákra túl alacsony, a lOOmg/lOOml glükóztar- 10 talom feletti mintákra túl magas értéket kapunk a tényleges tartalomhoz képest. Csak az olyan mintakoncentrációkra kapunk korrekt mérési értékeket, amelyek pontosan megfelelnek a standard koncentrációjának. A találmány szerinti B reagens ezzel 15 szemben végig helyes értékeket szolgáltat. A humán-szérum mintákkal a fent leírt módon kaptunk eredményeket, míg összehasonlításhoz a hexokináz-módszer (standard-módszer) szerint kapott értékeket határoztuk meg. Az eredményeket a következő táblázat mutatja. 20 HK/G6P-DH (standard-módszer) A reagens B reagens 1. szérum 53 mg/100 ml nincs mérési érték 51 mg/100 ml 2. szérum 84 mg/100 ml 55 mg/100 ml 83,5 mg/100 ml 3. szérum 135 mg/100 ml 213 mg/100 ml 135 mg/100 ml Szabadalmi igénypontok: 35 1. Reagens enzimszubsztrát enzimatikus meghatározására, amely a szubsztrát meghatározására szolgáló olyan rendszert tartalmaz, amely legalább egy enzimből, legalább egy pufferanyagból és legalább 40 egy indikátoranyagból, valamint adott esetben segédanyagokból áll, azzal jellemezve, hogy a fentieken kívül ezen szubsztrát meghatározására szolgáló rendszer szubsztrátmeghatározó kapacitásánál kevesebb, meghatározott mennyiségű szubsztrátot is tartalmaz. 45 2. Az 1. igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy szubsztrátként glükózt tartalmaz, és a szubsztrát meghatározására szolgáló rendszer glükózoxidázból, peroxidázból, 2,2’-azino-di(3- -etil-benztiazolin-6-szulfonát)-ból és pufferból áll. 50 3. Az 1. igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy szubsztrátként húgysavat tartalmaz, és a szubsztrát meghatározására szolgáló rendszer urikázból, peroxidázból, 2,4-diklór-fenolátból, 4-amino-antipirinből és pufferból áll. 55 4. Az 1. igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy szubsztrátként koleszterint tartalmaz, és a szubsztrát meghatározására szolgáló rendszer koleszterin-észterázból, koleszterin-oxidázból, peroxidázból, 4-amino-antipirinből, fenolból és pufferból áll. 5. Az 1. igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy szubsztrátként glükózt tartalmaz, és a szubsztrát meghatározására szolgáló rendszer glükózoxidázból, peroxidázból, 4-amino-fenazonból, fenolból és pufferból áll. 6. Eljárás enzimszubsztrát olyan zavaró anyagok jelenlétében való enzimatikus meghatározására, amelyek a szubsztráttal magával vagy az indikátorreakció egy köztitermékével vagy végtermékével reagálhatnak, azzal jellemezve, hogy a vizsgálandó minta hozzáadása előtt először a szubsztrát meghatározott, a reagens szubsztrát meghatározó kapacitásánál kisebb mennyiségét reagál tatjuk a reagenssel, amíg elreagál, és csak utána adjuk hozzá a meghatározandó mintát. 1 ábraoldal A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 84.4273 - Zrínyi Nyomda, Budapest 4
