181013. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új enkefalin analógok előállítására
5 181013 6 II. táblázat A Tyr—D-Nle-Gly-Phe-D-NleS, Tyr-D-Ala-Gly-Phe-NleP és a morfin keringésre kifejtett hatása altatott macskán3 Vegyidet Dózis mg/kg i.v. Vérnyomássüllyedés Hgmm Pulzusszámcsökkenés verés/perc c.o.b gátlás Tyr-D-Nle-Gly-Phe—D—NleS 0,1 32,5 ± 1,4 25,0 ±2,0 ++ Tyr-D—Alá—Gly—Phe—NleP 0,1 22,5 ± 1,4 21,3 ±4,3 ++ morfin 0,2 6,7 ±2,1 0 0 1,0 16,7 ± 3,2 10,2 ± 2,3 •f 5,0 33,3 ± 6,7 16,7 ± 3,5 + f 335 mg/kg-i.p. adott pentobarbitállal altatott 3—4 kg-os macskák. bc.o. = carotis occlusióval kiváltott vasomotor-reflex gátlás: + = kisebb, mint 50%, « = nagyobb mint 50%.-csoportot tartalmaznak. Korábban ezt az enzimrezisztenciát csak a terminális aminosav savkarakterének megszüntetésével, pl. a karboxil-csoport amidálásával, észteresítésével vagy karbinollá történő redukciójával lehetett csupán elérni. Az ilyen jellegű módosítások - amint az enkefalin analógok vizsgálatából kitűnik — lényegesen módosítják a peptidek eredeti hatás-spektrumát, biológiai jellegét. A fentiek alapján a találmány eljárás I általános képletű - ahol Tyr, Gly, Phe, X és Y jelentése a fenti - új enkefalin analógok és sóik előállítására, mely abban áll, hogy valamely 4 szénatomos alkil-oldalláncú L-, D- vagy DL-alfa-amino-foszfonsavat vagy -szulfonsavat a peptidkémiában ismert módon, az 1 általános képlet szerint rendre következő, amino-csoportján lehasítható védőcsoporttal ellátott amiíiosavakkal és/vagy terminális amino-csoportján lehasítható védőcsoporttal ellátott peptid-fragmensekkel kapcsoljuk, az így kapott vegyületről az aminő terminális védőcsoportját eltávolítjuk, és a szabad pepiidet, vagy adott esetben fémsóját elkülönítjük. A találmány szerinti eljárás egy előnyös foganatosítási módja szerint úgy járunk el, hogy egy 4 szénatomos alkil-oldalláncú DL-alfa-amino-foszfonsavat vagy -szulfonsavat mólekvivalens bázis jelenlétében amino-csoportján védett L-fenilalaninból készített vegyes anhidriddel acilezzük, a védőcsoport eltávolítása után a kapott szabad diasztereomer dipeptideket L-L és L—D dipeptidre választjuk szét, majd ezek bármelyikét kapcsoljuk a terminális amino- csoportján lehasítható védőcsoporttal, előnyösen terc-butiloxikarboníl-csoporttal ellátott tripeptid fragmenssel vegyes anhidrid vagy aktív észter módszert alkalmazva, a keletkező védett pentapeptidről lehasítjuk a védőcsoportot, és a szabad pentapeptidet, vagy adott esetben fémsóját elkülönítjük. A benziloxikarbonil-csoportot előnyösen a hidrálandó anyagra számított 10-20% mennyiségű 30 10%-os csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogenolízissel távolítjuk el. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 35 Az Rf értékeket szilikagél rétegkromatográfiával határoztuk meg (Kieselgel G., Reanal, Budapest) az alábbi oldószerekben: 1. etilacetát-piridin—ecetsav-víz 40- 960 : 20 : 6 : 11 2. etilacetát-piridin-ecetsav-víz - 240 : 20 : 6 : 11 3. etilacetát-piridin-ecetsav-víz - 120:20:6:11 45 4. etilacetát-piridin—ecetsav-víz - 80:20:6:11 5. etilacetát-piridin—ecetsav—víz - 60 : 20 : 6 : 11 6. etilacetát-piridin-ecetsav-víz 50- 30 : 20 : 6 : 11 7. etilacetát-piridin-hangyasav-víz - 60 : 20 : 6 : 5,5 8. etilacetát-piridin-hangyasav-víz - 30:20:6:5,5 55 9. n-butanol—ecetsav-víz -4:1:1 10. kloroform—metanol—ecetsav - 90 : 5 : 5 11. kloroform-metanol—ecetsav 60-3:1:1 12. kloroform—n-hexán-ecetsav - 8 : 1 : 1 13. kloroform-aceton - 9 : 1 65 14. kloroform 3
