180997. lajstromszámú szabadalom • 3-(-dihidroxi-5- pirimidil)-ureido]-acetilamino)-2,2-dimetil-penam-3-karbonsav-származékok előállítására
23 180997 24 A R Példa 2-tienil-3-dimetilureidofenil-3-ciklopropilureido-211 fenilpirrolidinilkarbonilaminop-hidroxifenilpirrolidinilkarbonilamino-211 p-hidroxi-m-klórfenilpirrolidinilkarbonilaminom,p-dihidroxifenilpirrolidinilkarbonilaminofenil-3-fenilureido-211 p-hidroxifenil-3-fenilureido-210 A fenti penicillinszármazékokkal például olyan lokális és/vagy szisztémiás megbetegedések kezelhetők és/vagy gátolhatok, amelyeket az alábbi kór- 15 okozók vagy ezek keverékei idéznek elő: Micrococcaceae, így Staphylococcusok, Lactobacteriaceae, így Streptococcusok, Neisseriaceae, így Neisseriák, -0 Corynebacteriaceae, így Coryne-baktériumok, Enterobacteriaceae, így coli-csoportbeli Escherichia-baktériumok, Klebsiella-baktériumok, például Klebsiella pneumonia, 25 Proteae-baktérium a Proteus csoportból, például Proteus vulgaris, Salmonella-baktériumok, például S. thyphimurium, Shigella-baktériumok, például Shigella dysente- 30 riae, Pseudomonas-baktériumok, például Pseudomonas aeruginosa, Aeromonas-baktériumok, például Aeromonas lique faciens, 35 Spirillaceae, így Vibrio-baktériumok, például Vibrio cholerae, Parvobacteriaceae vagy Brucellaceae, így Pasteurella-baktériumok, Brucella-baktériumok, például Brucella abortus, 40 Haemophilus-baktériumok, például Haemophilus influenzae, Bordetella-baktériumok, például Bordetella pertussis, Moraxella-baktériumok, például Moraxella lacu- 45 nata, Bacteroidaceae, így Bacteroides-baktériumok, Fusiforme-baktériumok, például Fusobacterium fusiforme, Sphaerophorus-baktériumok, például Sphaero- 50 phorus necrophorus, Bacillaceae, így aerob spóraképzők, például Bacillus anthracis, Anaerob spóraképző Chlostridiák, például Chlostridium perfringens, 55 Spirochaetaceae, így Borrelia-baktériumok, Treponema-baktériumok, például Treponema pallidum, Leptospira-baktériumok, így Leptospira interrogans. 60 A kórokozók fenti felsorolása csupán példaszerű, de nem korlátozó jellegű. A találmány szerint előállított penicillinek hatását az alábbi kísérletek igazolják. 65 1. In vitro kísérletek A kísérletekhez a sorozathígításos vizsgálati eljárást alkalmaztuk mikrotiterrendszerben. Az anyagok baktériumgátló hatásának vizsgálatát folyékony közegben végeztük. A baktériumgátló hatást az alábbi koncentrációkban vizsgáltuk: 80, 40, 20, 10, 5, 2,5, 1,25, 0,6, 0,3, 0,08 és 0,02 jug/ml. Az alábbi összetételű táptalajt használtuk: 10 g pepton, 8 g húskivonat-oxoid, 3 g nátriumklorid, 2 g szek-nátriumfoszfát, vízzel 1000 ml-re feltöltve, a pH-értéke 7,2—7,4. Csak a sztreptococcusok vizsgálatánál tettünk a táptalajhoz 1% glükózt. A primertenyészet kb. 20 órás volt. A csíraszuszpenzió beállítását fotométerrel (Eppendorf) (a reagens-küvetta átmérője 14 mm, 546 nm-es szűrő) végeztük, báriumszulfát összehasonlító-szuszpenzió zavarossága alapján, amit báriumszulfát szuszpendálásával készítettünk úgy, hogy 3,0 ml 1% báriumkloridoldatot 97 ml 1%-os kénsavhoz adtunk. A beállítás után a Streptococcus Aronson-t 1 :15 arányban, a többi kísérleti csírát 1 :1500 arányban konyhasóoldattal hígítottuk tovább. A mindenkori anyagból 16mg-ot lOml-es mérőlombikba mértünk, és az oldószerrel jelig töltöttük. A további hígítássorozatot desztillált vízzel, vagy a mindenkori oldószerrel készítettük. A mikrotiterlemez mélyedéseibe 0,2 ml táptalajt, 0,01 ml megfelelő anyaghígítást és egy csepp (0,01 ml) csíraszuszpenziót tettünk, és 18-20 órán át 37 °C-on inkubáltuk. Oldószerkontrollt minden esetben végeztünk. A leolvasás makroszkóposán történt, a mindenkori határkoncentráció (a még bakteriosztatikusan hatásos legkisebb koncentráció) megállapításával. Tesztorganizmusként az alábbiakat használtuk: Staphylococcus aureus SG 511, Streptococcus Aronson, Streptococcus faecalis ATCC 10541, Escherichia coli ATCC. 9637, 11 775 és Escherichia coli 12593/74 (0-laktám-hordozó), Pseudomonas aeruginosa Hamburgensis és ATCC 10145, Serratia marcescens ATCC 13 880, Klebsiella pneumoniae ATCC 10 031 és 272 és Proteus mirabilis Hamburgensis. A következőkben a találmány szerint előállított vegyültek tipikus képviselőire kapott minimális gátló koncentrációkat (MIC) szemléltetjük. A vegyületeket nátriumsóik alakjában alkalmaztuk, az A és R szubsztituensek jelentése és a vegyületek betűjele a következő: 12
