180926. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a központi idegrendszerre ható, új TRH-analóg tripeptid-amidok előállítására
21 180926 22 3,24 g (12,3 mmól) H-Leu-Pro-NH2. HCl-ot szuszpendálunk 50 ml DMFA-ban és a szuszpenzióhoz, jeges hűtés és keverés közben 5,6 g (13 mmól) Z-D-Glp-OPFP-t és 1,72 ml (12,3 mmól) trietilamint adunk. 5 perc keverés után újabb 1,72 ml (12,3 mmól) trietilamint adunk a reakcióéi egyhez, majd további 20 perc keverés után vákuumban bepároljuk. A maradékot feloldjuk 120 ml kloroformban és az oldatot kétszer 30 ml n sósavval, háromszor 30 ml n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 30 ml vízzel kirázzuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. Az olajos maradékot éterrel kristályosítva 5,31 g nyers terméket kapunk, amelyet 50 ml etilacetáttal felforralunk, majd a szuszpenziót három órára hűtőszekrénybe helyezzük, végül a csapadékot kiszűrjük. Így 4,61 g (80%) Z-D-Glp-Leu-Pro- NH2-ot kapunk, olvadáspont: 189—194 °C R* = 0,44, [a]^ =—31,2° (c=l, ecetsavban). 3. lépés D-Piroglutamil-L-leucil-L-prolin-amid 4,48 g (9,5 mmól) Z-D-Glp-Leu-Pro-NH2-ot feloldunk 200 ml metanolban, az oldathoz 0,9 g 10%- os csontszenes palládium-katalizátort adunk és 1 órán keresztül hidrogéngázt buborékoltatunk át rajta. A katalizátor kiszűrése után a szűrletet bepároljuk és a maradék amorf anyagot éterrel eldörzsöljük. A 3,07 g nyers terméket vízben oldva derítjük és a víztiszta oldatot liofilizáljuk. Így 2,90 g (90,5%) D-Glp-Leu- Pro-NH2-ot kapunk, R* = 0,40, [a]“ =—23,6° (c=l, ecetsavban). 15. példa Orotil-L-hisztidil-L-pipekolinsav-amid 1. lépés Oroíil-L-hisztidin-metilészter 24,2 g (100 mmól) H-His-OMe.-2HCl-ot feloldunk 120 ml DMFA-dioxán 1:1 arányú elegyében és az oldathoz 17,41 g (100 mmól) orotsavmonohidrátot adunk. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük és 11,5 g (100 mmól) N-hidroxi-szukcinimidet, 11,1 ml (100 mmól) N-metil-morfolint, végül 20,6 g (100 mmól) DCC-t adunk hozzá. A reakcióelegyet 1 óra hosszat 0 °C-on, majd éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután 2 óra hosszat hűtőszekrényben tartjuk, a DCU-t kiszűrjük és a szűrletet bepároljuk. A maradék olajat vízzel kristályosítjuk, a kristályokat kiszűrjük, a szűrőn 5%-os citromsavoldattal és vízzel mossuk. Így 11,6 g (38%) Oro-His-OMe-t kapunk, olvadáspont: 258—262 °C, R® =0,40, Elemzési eredmények a Ci2H|.jO-,N-, összegképlet (molekulasúly: 307,27) alapján: számított: N 22,79%; talált: N 22,51%. 2. lépés Orotü-hisztidin-hidrazid 9,21 g (30 mmól) Oro-His-OMe-t feloldunk 120 ml DMFA-ban és az oldathoz 7,35 ml (150 mmól) hidrazin-hidrátot öntünk. A reakcióelegyet 2 napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 100 ml etilacetáttal hígítva éjszakán át hűtőszekrényben tartjuk. Ezután a kivált csapadékot kiszűrjük és a nyers terméket metanolból átkristályosítjuk. Így 8,07 g (88%) Oro-His-N2- Hs-t kapunk, olvadáspont: 250—260 °C, Rj = 0,35. Elemzési eredmények a ChH^OîNî összegképlet (molekulasúly:307,28) alapján: számított: N 31,91%; talált: N 30,75%. 3. lépés Orotil-L-hisztidil-L-pipékolinsav-amid 5,0 g (16,28 mmól) Oro-His-N2H3-t szuszpendálunk 135 ml DMFA-ban és a szuszpenzióhoz 5,99 ml (48,84 mmól) 8,1 n sósavas dioxánt öntünk. A kapott oldatot —15 °C-ra hűtjük és keverés közben 2,13 ml (17,9 mmól) terc-butil-nitritet csepegtetünk hozzá. Ezután a reakcióelegyet 20 percig —10 °C-on keverjük, majd 4,56 ml (32,56 mmól) trietilamint, 10 ml DMFA-ban oldott 2,05 g (16,28 mmól) H-Pip-NH2-ot, végül még 2,28 ml (16,28 mmól) trietilamint csepegtetünk hozzá, —10 °C-on. Becsepegtetés után a reakcióelegyet további 1 óra hosszat keverjük —10 °C-on, majd éjszaka 2 °C-on állni hagyjuk. Másnap a csapadékot kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk és a maradékot etilacetáttal eldörzsöljük. Az így kapott 4,6 g (74%) nyers termékből 1,3 g-ot karboxi-metil-cellulóz-23 és karboxi-metil-cellulóz-52 1:1 arányú keverékéből készített oszlopra visszük és 0,005—0,1 mólos ammónium-acetát-oldattal (pH 5) eluáljuk. A tiszta terméket tartalmazó frakciókat liofilizáljuk. Így 820 mg amorf Oro-His-Pip-NH2-ot kapunk, R)j =0,10, [ajn^—19,0° (c=l, vízben) aminosav-analízis: His: 1,00 (1,0); Pip: 0,94 (1,0). 16. példa Grotü-L-hisztidil-D-pipekolinsav-amid 5 g (16,28 mmól) Oro-His-N2H3-t szuszpendálunk 135 ml DMFA-ban és a szuszpenzióhoz 5,99 ml (48,84 mmól) 8,1 n sósavas dioxánt öntünk. A kapott oldatot —15 °C-ra hűt jük és keverés közben 2,13 ml (17,9 mmól) terc-butil-nitritet csepegtetünk hozzá. Ezután a reakcióelegyet 20 percig —10 °C-on keverjük, majd 4,56 ml (32,56 mmól) trietilamint, 10 ml DMFA-ban oldott 2,05 g (16,28 mmól) H-D-Pip-NH2-ot végül még 2,28 ml (16,28 mmól) trietilamint csepegtetünk hozzá, —10 °C-on. Becsepegtetés után a reakcióelegyet további 1 óra hosszat keverjük —10 °C-on, majd éjszaka 2 °C-on állni hagyjuk. Másnap a csapadékot kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk és a maradékot etilacetáttal eldörzsöljük. Az így kapott 4,1 g (66%) nyers termékből 1,3 g-ot karboxi-metil-cellulóz-23 és karboxi-metil-cellulóz-52 1:1 arányú keverékéből készített oszlopra visszük és 0,005—0,1 mólos ammónium-acetáttal (pH 5) eluáljuk. A tiszta terméket tartalmazó frakciókat liofilizáljuk. így 795 mg amorf Oro-His-D-Pip-NH2-ot ka-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
