180787. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cisztein-tartalmú peptidek előállítására
19 180787 20 teljessé tesszük). A kapott olajos maradékot 300 ml etil-acetát és 300 ml víz közötti megosztásnak vetjük alá. Az etil-acetát-fázist kétszer 150—150 ml pH = 3-as citrát-puffer-oldattal és egyszer 150 ml vízzel kirázzuk, vízmentes nátrium-szulfát fölött megszárítjuk és bcpároljuk. Kitermelés: 138.7 g (78,7 g= 100%). A kapott olajat további tisztítás és azonosítás nélkül 150 millimól anyagként továbbvisszük a következő reakcióba. Összegképlet: C26H4„N209. Molekulasúly: 524,6. b3) Ddz-Val-Glu(OBu‘)-Gln-ONb A 9. b2) példa szerinti nyers, szennyezett termék 138,7 gját (=150 millimólt), 47,65 g (150 millimól) H-Gln-ONb. HCl-t és 20,25 g (150 millimól) HOBt-t feloldunk 450 ml dimetil-formamidban és ehhez az oldathoz 0 C° hőmérsékleten 19,2 ml (150 millimól) N-etil-morfolint és 33 g (160 millimól) DCC-t adunk. A reakcióelegyet 0 C° hőmérsékleten 1 órán keresztül és szobahőmérsékleten 4 órán keresztül keverjük. Ezután szobahőmérsékleten éjszakán át állni hagyjuk, leszívatjuk a csapadékot és a szűrletet nagyvákuumban bepároljuk. A kapott olajat 300 ml etil-acetát és 300 ml víz közötti megosztásnak vetjük alá. Az etil-acetátfázist egymás után kirázzuk a következő oldatokkal: telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat, pH = 3-as citrát-pufferoldat, telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat és viz, majd vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. A kapott olaj éterrel kristályosodik. A kristályokat éterrel mossuk. Kitermelés: 110,95 g (94%). Op: 135-138 C°, 138-142C°. [a]o = -49,4° (c=l, metanolban). Elem-analízis a C38H53N5013 összegképlet alapján (molekulasúly: 787,9): számított: C = 57,93%; H = 6,78%; N = 8,89%; talált: C = 57,8 %; H = 7,0 %; N = 9,2 %. b4) H-Val-GIu(OBu')-Gln-ONb-trifluor-acctát 39,4 g (50 millimól) Ddz-Val-GlutOBu^-Gln-ONb-t feloldunk 875 ml 5%-os, 1% vizet tartalmazó metilén-kloridos trifluor-ecetsav (=500 millimól trifluor-ecetsav) és 87,5 ml anizol elegyében. A reakcióelegyet 30 percig hagyjuk állni szobahőmérsékleten, majd 50 ml piridinnel semlegesítjük és bepároljuk. Nagyvákuumban még szárítjuk. A maradékot etil-acetát és víz közötti megosztásnak vetjük alá. Az etilacetát-fázist még kétszer kirázzuk kevés vízzel, vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. A maradékot eldörzsöljük éterrel és nagyvákuumban szárítjuk. Kitermelés: 23.6 g (69%) amorf cím szerinti termék, [a],, = —5,3° (c = 1, metanolban). Elem-analízis a C26H39N509 ■ CF3COOH összegképlet alapján (molekulasúly: 679,67): bs) Ddz-Gly-Ile-OMe 14,54 g (80 millimól) H-Ile-OMe ■ HC1 és 10,8 g (80 millimól) HOBt 50 ml dimetil-formamidos oldatához - 3 C° hőmérsékleten 10,3 ml (80 millimól) N-etil-morfolint, majd 0 C° hőmérsékleten 40 g (84 millimól) Ddz-Gly-OTcp adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 3 órán keresztül keverjük, majd éjszakán át állni hagyjuk. (Másnap a vékonyrétegkromatogrammban még kimutatható valamelyes H-Ile-OMe. Ilyenkor még hozzáadunk a reakcióelegyhez 2,86 g [6 millimól] Ddz-Gly-OTcp-t és keverjük. 5 órás keverés után már nem mutatható ki H-Ile-OMe a vékonyrétegkromatogrammban). A vékonyrétegkromatográfiai szempontból H-Ile-OMe-mentes oldatot nagyvákuumban bepároljuk és a kapott olajat etil-acetát és víz közötti megosztásnak vetjük alá. Az etil-acetát-fázist egymás után a következő oldatokkal mossuk: telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldat, pH = 3-as citrát-puffer-oldat, nátrium-hidrogén-karbonát-oldat és víz, majd vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk. A kapott etil-acetát-oldatot 400 g bázikus alumínium-oxidon át szűrjük. Kitermelés: 30,6 g (90%) viszkózus olaj. [a]o = —6,8° (c = 1, metanolban). Elem-analízis a C2iH32N207 összegképlet alapján (molekulasúly: 424,5): számított: C = 59,42%; H = 7,60%; N = 6,60%; talált: C = 59,1 %; H = 7,7 %; N = 6,3 %. b6) Ddz-Gly-Ile-OH 10 g (23,56 millimól) Ddz-Gly-Ile-OMe-t feloldunk 24 ml dioxán és 8 ml víz elegyében és timol-ftalein-indikátort alkalmazva, 1 n nátrium-hidroxid-oldattal szárítjuk. Az etil-acetát-tartalomtól függően több mint 23 ml In nátriumhidroxid-oldat fogy. A reakcióelegyet citromsavval semlegesítjük, majd lepároljuk a dioxánt. A maradékot feloldjuk kevés vízben és az oldat pH-ját 0 C° hőmérsékleten 2 n citromsav-oldattal beállítjuk 3-ra. Az elváló olajat etilacetáttal extraháljuk. A vizes fázist — szükséges esetben- újból megsavanyítjuk pH = 3-ra és etil-acetáttal extraháljuk. Az egyesített etil-acetát-extraktumot vízzel egyszer kirázzuk, vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. Nagyvákuumban szárítjuk. Amorf terméket kapunk. Kitermelés: 8,9% (92%). Op: 80—90C°. [a]fj = +4,2° (c = 1, metanolban). Elem-analízis a C2oH30N207 összegképlet alapján (molekulasúly: 410,48): számított: C = 58,52%; H = 7,37%; N=6,83%; talált: C = 58,8 %; H = 7,5 %; N = 6,5 %. bn) Ddz-Gly-Ile-VaI-Glu(OBu‘)-Gln-ONb 15,8 g (38,5 millimól) Ddz-Gly-Ile-OH, 23,8 g (35 millimól) H-Val-Glu(OBu‘)-Gln-ONb-trifluor-acetát és 5,2 g (38,5 millimól) HOBt 60 ml dimetil-formamidos oldatához 0 C° hőmérsékleten 4,48 ml (35 millimól) N-etil-morfolint és 8,47 g (41 millimól) DCC-t adunk. A reakcióelegyet 0C° hőmérsékleten 1 órán keresztül, szobahőmérsékleten több órán keresztül keverjük, majd éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Gélszerű anyag keletkezik, amelyet belekeverünk lehűtött nátrium-hidrogén-karbonát-oldatba. A terméket leszívatjuk és egymás után eldörzsöljük a következő oldatokkal: pH = 3-as citrát-puffer-oldat, nátrium-hidrogénkarbonát-oldat és víz, közben mindig leszívatjuk. Végül foszfor-pentoxid fölött szárítjuk. Kitermelés: 40,3 g. A terméket a további tisztítás céljából 500 ml etanolból átkristályosítjuk. Kitermelés: 21,45 g (64%). Op: 205— 207 C°. [a]p = — 12,3° (c= 1, dimetil-formamidban). Egy kisebb sarzs, kisebb kitermeléssel a következő olvadáspontú terméket adta. Op: 212—214 C°. [ajjj = —16,1° (c= 1, dimetil-formamidban). Elem-analízis a C46H67N70,5 összegképlet alapján (molekulasúly: 958,1): számított: C=57,57%; H = 7,05%; N= 10,23%; talált: C = 57,6 %; H = 7,2 %; N = 10,0 %. s 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
