180787. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cisztein-tartalmú peptidek előállítására
180787 14 mely 1% vizet tartalmaz) és 17,5 ml anízolból álló elegy ben. A reakcióelegyet 4 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd hozzáadunk 10 ml (124 millimól) piridint és bepároljuk. A maradékot eldörzsöljük éterrel és vákuumban szárítjuk. Ezután eldörzsöljük a terméket vízzel, leszívatjuk, vízzel mossuk és foszfor-pentoxid fölött szárítjuk. A terméket további tisztítás céljából kétszer kiforraljuk 100—100 ml etil-acetáttal és mindkét esetben forrón leszívatjuk. Kitermelés: 22,7 g (99%). Op: 234 C° (bomlás közben). [a]56 = - 11,7° (c = 1, dimetil-formamidban). Aminosav-analízis a C, ,7Hi55Nls021S2 ■ CF3COOH öszszegképlet alapján (molekulasúly: 2285,8): 13 Asp Ser Glu Cys Ile Leu Tyr számított: 2 1 2 2 1 2 2 talált: 2,05 0,99 1,88 0,43 0,73 2,12 2,05 7. példa a) H-Cys-Cys-Thr-Ser-OH-trifluor-acetát 615,8 mg (0,5 millimól) Ddz-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Thr(Bu1)-Ser(Bu‘)-OH-t feloldunk 2,5 ml etil-merkaptán és 2,5 ml trifluorecetsav elegyében. A reakcióelegyet 4 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd beleöntjük 50 ml vízbe. A vizes fázist éterrel háromszor extraháljuk és liofilizáljuk. Kitermelés: 240 mg (88%). [<x]d = -24,3° (c = 1, vízben). Elem-analízis a C13H24N407S2 • CF3COOH ■ H20 összegképlet alapján (molekulasúly: 544,5): számított: C = 33,08%; H= 5,00%; N= 10,29%; S= 11,77%; talált: C = 34,4 %;H = 5,1 %;N=10,0 %;S = 11,1 %. b) A Ddz-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Thr(Bu')-Ser(Bu‘)-OH kiindulási anyag előállítása 6,) Z-Thr(Bu')-Ser(Bu')-OH 16,1 g (0,1 mól) H-Ser(Bu)-OH [Chem. Ber„ 97. 2490 (1964)] 100 ml dimetil-formamidos szuszpenziójához 0 C° hőmérsékleten hozzáadunk 12,8 g (0,1 mól) N-etil-morfolint és 40,6 g (0,1 mól) Z-Thr(Bu)-OSu-t [Hoppe Seyler: Z. Physiol. Chem., 346. 60 (1966)]. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 5 órán keresztül keverjük, majd éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Vékonyrétegkromatográfiai kontrollt végzünk H-Scr(Bü)-OíJ-ra. Ha e vegyület vékonyrétegkromatográfiailag már nem érzékelhető, úgy leszűrjük az esetleg jelenlévő oldatlan anyagot. A szűrletet bepároljuk és a maradékot éter és 110ml In citromsav-oldat közötti megosztásnak vetjük alá. Az éter-fázis és 100 ml 0,5 n citromsav-oldat közötti újbóli megosztást végzünk, majd az éter-fázist vízzel és nátrium-klorid-oldattal semlegesre mossuk és vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk, bepároljuk és nagyvákuumban szárítjuk. Kitermelés: 32,6 g (72%) amorf cím szerinti termék. [a]jy = + 24,1° (c = 1, metanolban). Elem-analízis a C22H3(iN207 összegképlet alapján (molekulasúly: 452,55): számított: C = 61,04%; H = 8,02%; N = 6,19%; talált: C = 60,3 %; H = 7,4 %; N = 6,2 %. b2) H-Thr(Bul)-Ser(Bu')-OH ■ HC1 25 g (55,25 millimól) Z-ThríBu'j-SeríBu'j-OH-t feloldunk 200 ml metanolban és automata titráló berendezésben sósavas metanol hozzáadása közben (pH = 4,5) katalitikusán hidrogénezzük, katalizátorként 10%-os bárium-szulfátra lecsapott palládiumot alkalmazva. A hidrogénezés befejeztével leszívatjuk a katalizátort, bepároljuk a szűrletet és szárítjuk. Kitermelés: 1,1 g amorf termék (19,60=100%). [«3d = +27° (c=l, metanolban). Elem-analízis a C15H31N205C1 összegképlet alapján (molekulasúly: 354,9): számított: C = 50,77%; H = 8,80%; N = 7,89%; talált: C = 50,9 %; H = 8,8 %; N = 7,8 %. b3) Ddez-Cys(Trt)-OH 36,4 g (0,1 mól) H-Cys(Trt)-OH [J. Org. Chem., 30. 1340 (1965)] 200 ml dimetil-formamidos szuszpenziójához 28 ml (0,2 mól) trietil-amint és 26,5 g (0,1 mól) Ddz-azidot adunk. A reakcióelegyet 40 C° hőmérsékleten 24 órán keresztül keverjük, majd az oldatot bepároljuk és a maradékot 100 ml jéggel hűtött 1 n citromsav-oldat és etil-acetát közötti megosztásnak vetjük alá. Az etilacetát-fázist pH = 3-as citrátpuffer-oldattal és nátrium-klorid-oldattal kirázzuk, vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. A terméket nagyvákuumban szárítjuk. Kitermelés: 37,6 g (64%) amorf cím szerinti termék. [a]f>2= +27° (c= 1, metanolban). Elem-analízis a C34H35N06S összegképlet alapján (molekulasúly: 585,7): számított: C = 69,72%; H = 6,02%; N = 2,39%; talált: C = 69,3 %; H = 6,3 %; N = 2,6 %; ú4) Ddz-Cys(Trt)-OTcp 5,9 g (mintegy 10 millimól) Ddz-Cys(Trt)-OH és 2,2 g (11 millimól) 2,4,5-triklór-fenol 50 ml abszolút tetrahidrofurános oldatához 0 C° hőmérsékleten hozzáadjuk 2,3 g DCC 15 ml tetrahidrofurános oldatát. A kapott reakcióelegyet 0 C° hőmérsékleten 2 órán keresztül keverjük, majd éjszakán át állni hagyjuk. A diciklohexil-karbamid-csapadékot leszívatjuk és a szűrletet bepároljuk. A maradékot feloldjuk metilén-kloridban és 100 g kovasavgél 60-on keresztül szűrjük. A cím szerinti terméket metilén-kloriddal eluáljuk. Kitermelés: 6,2 g (81%) amorf cím szerinti termék. [a]p = + 10,3° (c= 1, metanolban). Elem-analízis a C40H36Cl3NO6S összegképlet alapján (molekulasúly: 765,17): számított: C = 62,79%; H = 4,74%; N= 1,83%; S = 4,19%; talált: C = 61,0 %; H = 4,7 %; N= 1,7 %; S = 4,2 %. b5 ) Ddz-Cys(Trt)-Thr(Bu‘)-Ser(Bu')-OH 31,8 g (0,1 mól) (az anyag víz- vagy sav-tartalmától függően adott esetben több) H-Thr(Bu‘)-OH-t és 13,5 g (0,1 mól) HOBt-t feloldunk 100 ml dimetil-formamidban és az oldathoz 0 C° hőmérsékleten 12,8 ml (0,1 mól) N-etil-morfolint és 76,5 g (0,1 mól) Ddz-Cys(Trt)-OTcp-t adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten mintegy 6 órán keresztül keverjük, majd nagyvákuumban bepároljuk. A maradékot jeges víz és etil-acetát között megosztásnak vetjük alá. Az etil-acetát-fázist kirázzuk nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal; a Ddz-Cys(Trt)-Thr(Bu‘)-Ser(Bu')-OH nátriumsó5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
