180783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás timozinÓ1(inex lent) és/Asn2(index fölt)/-analógjai előállítására
180783 12 gyűjtjük, és minden egyes frakciót vékonyrétegkromatográfiás elemzésnek vetünk alá. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat (azaz a 225—229. frakciót) egyesítjük és kétszer fagyasztva szárítjuk. 0,223 g (48,1%) tiszta Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-t kapunk, amely papír-elektroforézis és vékonyrétegkromatográfiás elemzés szerint egységes. 0 15 g (39,5 mmól) Boc-Lys(Z)-OH, 5,8 g (50,5 mmól) HOSu, 8,66 g (42 mmól) DCC és 250 ml tetrahidrofurán elegyét 3 órán át keverjük. A kivált oldhatatlan mellékterméket kiszűrjük, és a szűrletet szárazra pároljuk. A kapott 24,2 g szirupszerű maradékhoz 150 ml izopropanolt és 150 ml petrolétert adunk. 21 g olajos, nem kristályosodó terméket kapunk. Az így kapott nyers Boc-Lys(Z)-OSu-t 72 órán át 250 ml dimetilformamidban, 5,5 ml Et3N jelenlétében 10,6 g (38 mmól) H-Lys(Z)-OH-val kondenzáljuk. A reakcióelegyet keverjük, és az enyhén lúgos kémhatás biztosítására az elegyhez időnként Et3N-t adunk. Az oldatból kiszűrjük a kis mennyiségű oldhatatlan anyagot, és a szűrletet 45 C°-on szárazra pároljuk. A kapott olajos maradékot 1 liter 5%-os vizes ecetsav-oldattal kezeljük. A kivált terméket etilacetáttal kivonjuk, A szerves fázist vízzel mossuk, nátriumszulfát fölött szárítjuk, bepároljuk, és az olajos maradékot 10 ml DCHA-t tartalmazó 300 ml etilacetáttal elegyítjük. A kapott kristályos sót metanolból és éterből átkristályosítjuk. 22,7 g (72,5%) Boc-Lys(Z)-Lys(Z)-OH ■ DCHA-t kapunk; op.: 160—162 C°, [ot]^5= - 2,21° (c = 1, metanol). 10 g (12,14 mmól) Boc-Lys(Z)-Lys(Z)-OH-DCHA-t 1 liter etilacetát és 1 liter 0,1 n vizes kénsavoldat között megoszlatunk. A szerves fázist vízzel háromszor mossuk, nátriumszulfát fölött szárítjuk, és szárazra pároljuk. Az így kapott 7,9 g Boc-Lys(Z)-Lys(Z)-OH-t 30 percig frissen készített, 4 n tetrahidrofurános sósavoldattal kezeljük. Az oldószert és a sav fölöslegét 30 C°-on lepároljuk, és a maradékról két ízben tetrahidrofuránt párolunk le. A kapott maradékot éteres kezeléssel megszilárdítjuk. A kivált HC1 • H-Lys(Z)-Lys(Z)-OH-t leszűrjük és éterrel többször mossuk. A kapott 6,7 g fehér, porszerű anyagot 70 ml dimetilformamidban oldjuk, az oldatot jégfürdőn hütjük, és 1,63 ml Et3N-t, majd 5,54 g (12,76 mmól) Boc-Glu(OBzl)-OSu-t adunk hozzá. Az elegyet 1 órán át 0 C°-on, majd 24 órán át 25 C°-on keverjük; ezalatt az elegy pH-ját Et3N időnkénti beadagolásával 7,5-ön tartjuk. A reakcióelegyet kevés ecetsavval pH = 3,5 értékre savanyítjuk, és az oldószert lepároljuk. A kapott maradékot etilacetátban felvesszük, az oldatot vízzel háromszor mossuk, nátriumszulfát fölött szárítjuk, és szárazra pároljuk. A kapott, félig megszilárdult maradékot éterrel eidörzsöljük, majd etilacetátból átkristályosítjuk. 7,26 g (69,5%) Boc-Glu(OBzl)-Lys(Z)-Lys(Z)-OH-t kapunk; op.: 153—155 C°, [a]25= -2,71° (c = 1, THF). g) 1,7 g (1,16 mmól) Boc-Glu(OBzl)-Val-Val-Glu(OBzl)-Glu(OBzi)-Aia-Glu(OBzl)-Asn-OBzl-t 30 percig 24 ml trihuorecetsavval kezelünk. A sav fölöslegét 30 C°-on lepároljuk, és a maradékot éterrel eldörzsöljük. A kapott porszerü anyagot éterrel és petroléterrel alaposan mossuk, és vákuumban nátriumhidroxid fölött szárítjuk. 1,71 g trifluoracetát-sót kapunk. 0,998 g (1,16 mmól) Boc-GIu(OBzI)-Lys(Z)-Lys(Z)-OH, 0,16 g (1,4 mmól) HOSu, 0,274 g (1,33 mmól) DCC és 15t ml dimetilformamíd elegyét 3 órán át 0 C°-on keverjük. A kapott oldathoz, amely Boc-Glu(OBzl)-Lys(Z)-Lys(Z)-OSu-t tartalmaz, 1,71 g CF3COOH H-Glu(OBzl)-Val-Val-G!u(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asn-OBzl-t és 0,2 ml Et3N-t adunk. Az elegyhez 15 ml dimetilformamidot és még néhány csepp Et3N-t adunk, és a kapott elegyet 11 3 napig 25 C°-on keverjük. Gélszerű, félig szilárd anyag képződik. Az elegyet ecetsavval megsavanyítjuk és vízzel kezeljük. A kivált fehér, szilárd anyagot leszűrjük, egymás után vízzel, metanollal és éterrel mossuk. A kapott 2,25 g nyers terméket (op.: 310—313 C°) dimetilformamidban oldjuk, majd metanollal kicsapjuk. 1,75 g (68,3%) Boc-Glu(OBzl)-Lys(Z)-Lys(Z)-Glu(OBzl)-Val-Val-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asn-OBzl-t kapunk; op.: 314— 316 C°, [a]^5= 13,68° (c = 1, DMSO). A termék vékonyrétegkromatográfiás elemzés alapján egységes. 0,5 g (0,226 mmól) Boc-Glu(OBzl)-Lys(Z)-Lys(Z)-Glu(OBzl)-Val-Val-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asn-OBzl-t 2 ml trifluorecetsavban oldunk, az oldathoz 15 ml hidrogénfiuoridot adunk, és az elegyet 15 percig 0 C°on keverjük. A sav fölöslegét 0 C°-on lepároljuk. A maradékot 5%-os vizes ecetsav-oldatban oldjuk, az oldatot éterrel háromszor mossuk, kis térfogatra bepároljuk, és a maradékot fagyasztva szárítjuk. 0,34 g nyers terméket kapunk. A nyers terméket a korábban ismertetett módon ioncserés oszlopkrdmatográfiával tisztítjuk. 0,13 g (42,1%) tiszta Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-t kapunk; [a]” =-85,65° (c=l, víz). h) 4,0 g (12,2 mmól) Boc-Leu-OSu-t 75 ml dimetilformamidban, 1,7 ml Et3N jelenlétében 48 órán át 3,42 g (12,2 mmól) H-Lys(Z)-OH-val kondenzálunk. A reakcióelegy pH-ját Et3N időnkénti beadagolásával 7,5 értéken tartjuk. Az oldhatatlan anyagot kiszűrjük, és a szürletet szárazra pároljuk. A kapott üvegszerű, habos anyagot 200 ml éterben oldjuk, és az oldathoz 3 ml DCHA-t adunk. A kivált kristályos anyagot leszűrjük, éterrel mossuk, majd metanolból és éterből átkristályosítjuk. 5,7 g (69,5%) Boc-Leu-Lys(Z)-OH • DCHA-t kapunk; op.: 140—142 C°, [a]^5= -7,20° (c= 1, metanol). 2,97 g (4,4 mmól) Boc-Leu-Lys(Z)-OH • DCHA-t etilacetát és 0,1 n vizes kénsavoldat között megoszlatunk, majd a szabad savat elkülönítjük. A kapott 2,2 g színtelen, olajos anyagot 30 percig 40 ml 4 n tetrahidrofurános sósavoldattal kezeljük. A sav fölöslegét és az oldószert 30 C°-on lepároljuk, és a maradékot éterrel kezeljük. A kapott olajos anyagot éterben oldjuk, és az oldatot bepároljuk. Ezt a műveletet még kétszer megismételjük. A kapott maradékhoz 1,85 g (4,4 mmól) Boc-Asp(OBzl)-OSu-t és 1,85 ml Et3N-t adunk, és az elegyet éjszakán át keverjük. Ezután a reakcióelegyet szárazra pároljuk. Az olajos maradékot etilacetátban felvesszük, az oldatot vízzel háromszor mossuk, nátriumszulfát fölött szárítjuk, és ismét szárazra pároljuk. A kapott nyers terméket etilacetátból és petroléterből kristályosítjuk. 1,52 g (49,6%) tiszta Boc-Asp(OBzl)-Leu-Lys(Z)-OH-t kapunk; op.: 109—111 C°, [afu5=- 16,14° (c=l, DMF). 1,2 g (0,545 mmól) Boc-Glu(OBzl)-Lys(Z)-Lys(Z)-Glu(OBzl)-Val-Val-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asn-OBzl-t 30 percig 35 ml trifluorecetsavval kezelünk. A sav fölöslegét gyors ütemben lepároljuk, és a maradékot éterrel többször eldörzsöljük. Fehér, porszerű anyagként 1,2 g undekapeptid-TFA-sót kapunk. Ezt a vegyületel 5 ml dimetilformamíd és 2 ml dimetilszulfoxid elegyében oldjuk, és Boc-Asp(OBzl)-Leu-Lys(Z)-OSu-va! reagáltatjuk. A reagens előállítása során 0,381 g (0,545 mmól) Boc-Asp(OBzl)-Leu-Lys(Z)-OH, 0,126 g (1,1 mmól) HOSu, 0,124g (0,599 mmól) DCC és 3 ml dimetilformamíd elegyét 3 órán át 0 C°-on keverjük; a kapott elegyet közvetlenül felhasznál5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
