180566. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-tronin előállítására mikrobiológiai úton
9 180 566 10 2. példa Az E. coli WNII Genetika M—1 termelő törzs oltóanyagát az 1. példában leírt módon állítjuk elő. A fermentációs készülék és a tápközeg öszszetétele az 1. példában elmondottaknak felel meg, azzal a különbséggel, hogy tápadalékként enzimesen készített élesztő-hidfolizátumot adunk a tápközeghez 0,5 t f% mennyiségben (az élesztő szárazsúlyára vonatkoztatva). A fermentáció körülményei az 1. példában leírtakhoz hasonlóak. 41 órás fermentáció után a tenyészlé 29 g/1 L-treonint tartalmaz. Az L-treonin feldúsulásának átlagos sebessége 0,71 g/l.óra. Az L-treonin elkülönítésére 300 ml tenyészléből a sejteket centrifugálással elválasztjuk. A felül úszó rész 7,5% szárazanyagot tartalmaz, optikai sűrűsége 0,6 (525 nm). Az oldatot vákuumban 50 °C-on 50 ml térfogatra betöményítjük, 50 ml etilalkoholt adunk hozzá, majd az elegyet 0 DC-on 5 órán át állni hagyjuk. A kivált kristályokat szűréssel elválasztjuk, 15 ml etilalkohollal mossuk, majd szárítjuk. 6,1 g L- treonint kapunk. A termék vékonyréteg-kromatográfiai vizsgálata azt mutatja, hogy egyéb aminosavakat nem tartalmaz. 3. példa Az oltóanyagot az 1. példában leírtak szerint kezeljük. A fermentálást 2 m3 űrtartalmű fermentorban végezzük az 1. példában foglaltak szerint, azzal a különbséggel, hogy tápadalékként élesztő-autolizátumot adagolunk 0,4 t f% mennyiségben (az élesztő szárazanyagára vonatkoztatva). A tápközeg penicillin-tartalma 0,2 g/1. A kiindulási sejt-koncentráció 103—104 sejt/ml. 43 órás fermentáció után a tenyészlé 18 g/1 L-treonint tartalmaz. A glukózfogyasztás hasonló, mint az 1. példa esetén. Az L-treonin feldúsulásának átlagos sebessége 0,42 g/l.óra. 5 Az L-treonint az 1. példában leírt módon izoláljuk. A hozam 80%. Szabadalmi igénypontok ^ 1. Eljárás L-treonin előállításána Escherichia coli termelő törzs szén- és nitrogénforrásokat és ásványi sókat tartalmazó tápközegben antibiotikumok jelenlétében végzett süllyesztett tenyészj,. tése, a biomassza elválasztása és a végtermék elkülönítése útján, azzal jellemezve, hogy termelő törzsként az Escherichia coli-nak a Szövetségi Genetikai Kutató Intézet Mikrobiológiai Letétbehelyezési Intézményében CMIM B—1856 2Q szám alatt letétbe helyezett törzsét alkalmazzuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy antibiotikumként penicillint alkalmazunk 0,1—0,5 g/1 mennyiségben. 25 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a tenyésztéshez az élesztő savval vagy fermentációs úton nyert hidrolizátumát vagy autolizátumát — az élesztő szárazsúlyára vonatkoztatva 30 — 0,1—0,5% mennyiségben tartalmazó tápközeget alkalmazunk. 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentálás alatt időszakonként szén- 35 forrást és ammóniát tartalmazó elegyet adunk a tenyészléhez. A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 82. 32 214 Petőfi Nyomda, KecsJcemét — Felelős vezető: Ablaka István igazgató 5
