180431. lajstromszámú szabadalom • Diagnosztikum proteolitikus enzimek kimutatására

7

180 431

8

szik, hogy a vizsgálandó testnedvekben bemártás, vagy pedig a kérdéses testnedvekhez való hozzáadás után a proteolitikus enzimek, különösen a leukociták proteázainak jelenlétét gyorsan és egyszerűen meghatározhassuk, színképződés alapján, amelynek mértékét vizuálisan, fotometriásan, például remissziós fotometriával, vagy küvettában mérve állapíthatjuk meg. A leukociták proteázainak sejtenkénti aktivitását lényegében konstans értéknek tekinthetjük, a vizsgált testnedvben lévő leukocita-koncentráció szabja meg a színképződés intenzitását. A találmány szerinti diagnosztikum alkalmazásával mind az intakt, mind pedig a lízises leukociták meghatározhatók, mivel a leukociták proteázainak aktivitása a leukociták lízise után is teljes mértékben megmarad. Ezért lízis miatti hiba nincsen.

1. példa

Szűrőpapírt (például Schleicher+ Schüll 23 SL) egymás után a következő oldatokkal impegnálunk, majd 60°C-on megszárítjuk.

1. oldat

Dinátrium-tetraborát-dekahidrát 1,91 g

Desztillált víz kb. 30 ml

Az oldat. pH-ját 0,1 n sósavval 8,0-ra állítjuk be Desztillált víz ad 100,0 ml

2. óidat

3—[N-(Benziloxi-karbonil)-L-alaniloxi]-indol 33,8 g Aceton ad 100,0 ml

Színtelen tesztpapírt kapunk, amely leukocita-tartalmú vizeletbe mártva, a leukocita-koncentrációtól függően világos türkiztől kékig színeződik. 5000 leukocita/uil vizelet körülbelül 2 perc múlva, 1000 leukocita/gl vizelet körülbelül 6 perc múlva, 500 Ieukocita/jj.1 vizelet körülbelül 10 perc múlva, 200 leukocita/jj.1 vizelet körülbelül 15 perc múlva, mutatható ki.

A vizsgálati módszer érzékenysége 200 leukocita/pl. A meghatározást remissziós fotometriával is elvégezhetjük 620 nm-nél.

Hasonló tulajdonságokkal rendelkező tesztcsíkokat (érzékenység 200—2000 leukocita/p.1) kaphatunk, ha 3-[N-(benziloxi-karbonil)-L-alaniloxi]indol helyett az alább felsorolt anyagokat alkalmazzuk; amennyiben külön említés nem történik, szintén türkiztől kék színeződés keletkezik, ha a tesztcsíkot leukocita-tartalmú vizeletbe mártjuk:

1.1. 3-[N-(benzíl-oxi-karboniI)-L-alaniI-oxí]-4- -metil-indol,

1.2. 3-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alanil-oxi]-5- -metil-indol,

1.3. 3-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alanil-oxi]-6- -metil-indol,

1.4. 3-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alanil-oxi]-7- -metil-indol,

1.5. 3-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alanil-oxi]-4-7- -dimetil-indol,

1.6. 3-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alanil-oxi]-4- -klór-indol,

1.7. 3-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alanil-oxi]-5- -bróm-indol,

1.8. 3- [N-(benzil-oxi-karbonil) -L-alanil-oxi ]-6--klór-indol, színeződés: színtelentől bíborszínig.

1.9. 3-[N-(toluol-4’-szulfonil)-L-aIanil-oxi]-4- -klór-5-bróm-indol,

1.10. 3- [N-toluol-4’-szulf onil)-L-alanil-oxi ]-4-klór-5-bróm-7-metil-indol,

1.11. l-metil-3- [N-(benzil-oxi-karbonil) -L-alanil-oxi]-indol, színeződés : színtelentől zöldig,

1.12. l-benzil-3-[N-(toluol-4’-szulfonil)-L-alanil-oxi]-indol, színeződés: színtelentől zöldig,

1.13. l-benzoil-3-[N-(toluol-4’-szulfonil)-L-alanil-oxij-indol,

színeződés: színtelentől ibolyaszínűig,

1.14. 3-[N-(benzil-oxi-karbonil)-glicil-oxi]-indol,

1.15. 3-[N-(toluol-4’-szulfonil)-glicil-oxi]-indol,

1.16. 3- [N-(toluol-2’-szulfonil)-L-alanil-oxi ]-idol,

1.17. 3-[N-(toluol-3’-szulfonil)-L-alanil-oxi]-indol,

1.18. 3-[N-(toluol-4’-szulfonil)-L-alanil-oxi]-indol,

1.19. 3-[N-(toluol-4’-szulfonil)-D-aIaniI-oxi]-indol,

1.20. 3-[N-(benzil-oxi-karbonil)-D,L-alanil-oxi]-indol,

1.21. 3-[N-(benziI-oxi-karbonil)-L-valil-oxi]-indol,

1.22. 3-[N-(toluol-4’-szulfonil)-L-valil-oxi]-indol,

1.23. 3-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-leucil-oxi]-indol,

1.24. 3- [N-(benziI-oxi-karbonil)-L-i zoleucil-oxi ]-indol,

1.25. 3-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-fenil-alanil-oxi]-indol,

1.26. 3-[N-(toluol-4’-szulfonil)-L-fenil-alanil-oxi]-indol,

1.27. 3-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-tirozil-oxi]-indol,

1.28. 3-[N-(toluol-4’-szulfonil)-L-tirozil-oxi]-indol,

1.29. 3- [N-(toluoI-4’-szulfoniI ) -0-acetil-L-tirozil-oxi]-indol,

1.30. 3-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alanil-L-alanil-oxi]-indoI,

1.31. 3-[N-(toluol-4’-szulfonil)-D-alanil-L-alanil-oxi]-indol,

1.32. 3-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-alanil-L-alanil-L-alanil-oxi ]-indol,

1.33. 3-[N-(toluol-4’-szulfonil)-D-alanil-D-alanil-L-alanil-oxi ]-indol,

1.34. 3- [N-formil-L-aJanil-oxi ]-indol,

1.35. 3- [N-acetil-L-alanil-oxi ]-indol,

1.36. 3-[N-szukcinil-L-alanil-oxi]-indol,

1.37. 3. [N-benzoil-D,L-alanil-oxi]-indol,

1.38. 3-[N-ftaloil-L-alanil-oxi]-indol,

1.39. 3-[N-(etoxi-karbonil)-L-alanil-oxi]-indol,

1.40. 3-[N-(terc-butíl-oxi-karboniI)-L-aIaniI-oxi]indol,

1.41. 3-[N-(3’,6’-dioxa-n-heptil-oxi-karbonil)-L-alanil-oxi]-indol,

1.42. 3-[N-(ciklohexil-oxi-karbonil)-L-alanil-oxi]-indol,

1.43. 3-[N-(fenil-oxi-karbonil)-L-alanil-oxi]-indol,

1.44. 3-[N-(4’-metil-benzil-oxi-karbonil)-L-alanil-oxi]-indol,

1.45. 3-[N-(4’-metoxi-benzil-oxi-karbonil)-L-alanil-oxi]-indol,

1.46. 3-[N-(4’-nitro-benzil-oxi-karbonil)-L-alanil-oxi]-indol,

1.47. 3-[N-(N’-{piperidino)-oxi-karbonil)-L-alanil-oxi]-indol,

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

4