180283. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunstimuláns di-O-N-alkil-glicerin-származékok előállítására
180.283 tartalmazó lemezre kitesszük éa 37°-on 5% CO?-atmoszférában 1 1/2 órán át inkubáljuk. Ezután a sejteket ^erősen mossuk a médiummal a le nem tapadt sejtek eltávolítása céljából. A megmaradt monocitákhoz újra médiumot adunk és L 1210 daganatsejteket adunk hozzájuk olyan mennyiségben, hogy az effektor-sejtek /monoclták/ és a ”céltábla"-sejtek /daganatsejtek/ aránya 15*1 legyen. A 13» példában leirt eljárást követve a sejteket <[I-timidinnel jelezzük éa a beépülést folyadék-szcintillátorban lemérjük. E módszert alkalmazva 1,25 mg/kg 4-amino-metil-l-'2,3- -di-n-decil-oxt/-n-pxopil -4-feni1-piperidin a BNS-szintézis 80 %—os gátlását eredményezi. 8. példa Vakcina-adjuválás - hemagglutináció-gátlási próba Az influenza-virus kölcsönhatásba lép a vörösvérsejtekkel és ennek eredményeként agglutlnáció következik be. Ha a szérummintában anti-virus antitestek vannak jelen, meggátlódik az agglutináclóhoz vezető virua-vörösvérsejt kölcsönhatás. így a vörösvérsejt-agglutináció hiánya antivirus ellenanyagok jelenlétét jelzi és a hemagglufcinációs titer meghatározása - az alábbiak szerint - az antitestszint mérésére használható. Kívánt koncentrációjú vizsgálandó vegyületeket tartalmazó készítményeket állítunk elő úgy, hogy a vegyületeket 0,3 ml etanolban oldjuk, majd 0,1 ml Tween 80-at adunk az oldathoz és a keveréket 4,6 ml Intralipidhez /Gutter Laboratories/ adjuk. Vizsgálandó vegyületet nem tartalmazó hordozóanyagot is készítünk. "Fluogen” influenza-vírussal keverjük el /Parke-Davis and Go,/ mindkét hordozóanyagot úgy, hogy 250 CGA antigént kapunk per 0,5 ml injekció-térfogat. Hartley-törzsü nőstény tengerimalocok /Gemi Laboratories/ egy csoportját intramuszkulárisan beoltjuk a Fluogent éa a vizsgálandó vegyületet tartalmazó vivőanyaggal* Egy kontroll tengerimslac-csoportot Fluogent tartalmazó, de vizsgálandó vegyületet nem tartalmazó hordozóanyaggal oltunk be. A primer immunizálást követő 30 nap múlva az állatokat ismét provokáljuk az előzőleg használt homolog antigén ujobb intramuszkuláris injekciójával. Az állatokból szivpunkcióval többször vért veszünk a primer immunizálás után. A szérumot ’’COEVAC Integrated Serum Separator Tube” segítségével /Corning Glass Works/ elválasztjuk és -20°-on tartjuk a hemagglutináclós teszttel való titrálásig, melyet az alábbiak szerint hajtunk végre. A teszt-szérumokat, melyeket 0,011 mólos kálium-jodátoldattal kezeltünk az agglutinációt gátló, nem-specifikus szérumfaktorok eltávolítása céljából, felező higitási sorral 0,025 ml térfogatban mikrotitrátorokba /Linbro Scientific Company, ITevj Haven, Conn.; IS-MRC-96 típus/ mérjük szét, melyek 0.01 mól f oszfátpuffert tartalmazó 0,025 ml fiziológiás konyhasóoldatot /a továbbiakban PBS/ tartalmaznak /pH 7,2/. A teszt virus-szuszpenziót, amely HA-4 egységet tartalmaz per 0,025 ml PEG* mindegyik mikrotltrátorhoz hozzáadjuk. Sejt-kontrolit /csak PBS/ és antigén-kontrolit /PJ3S + virus-antigén/ is készítünk. Iái után a lemezeket szobahőmérsékleten 30 percig inkubáltuk, 0,05 ml 0,5 %~oa sóoldattal mosott tyuk-vöröavérsejteket /Flow Laboratories^ Rockville, Md./ adunk mindegyik mikrotltrátorlioz. Az inkubáluat addig folytatjuk, amig a se jt-* kon troli 9
