180211. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-gvajakonsav előállítására és az ezt tartalmazó diagnosztikum
180211 merte tjük - előszöris a vizsgálandó széklet egy mintájával kenünk be. A minta megszáradása után a hordozó hátoldalát becsepegtetjük hidrogén-hiperoxid alkoholos oldatával, amikor is vér jelenléte esetében kék elszíneződés lép fel. A találmányt részletesebben az alábbi Példák kapcsán mutatjuk be. 1, Példa-A-gvajakonsav előállítása 200 g őrölt gvajakgyantát elkeverünk 500 ml acetonnal, • amikor is a gyanta egy csekély hányad kivételével oldatba megy. Az igy kapott oldathoz keverés közben 3 liter -toluolt csepegtetünk. Kb. 30 perc múltán a kivélt csapadékot /kb. 60 g/ leszivatjuk és ezt a maradékot eldobjuk. A szürletet vákuumban bepároljuk, amikor is kb. 160 g sötétbarna, üvegszerü maradékot kapunk. Ezt az anyagot melegítés közben feloldjuk 500 ml menynyiségü, 2:5 arányú n-heptán/etilacetát elegyben,majd az oldatot lehűlés után 8 cm átmérőjű,1,65 m magas /3,1 kg,0,063-0,2 mm szemcsenagyságu szilikagélből készített/ sziíikagel oszlopra öntjük.' Ezt megelőzően a szilikagélt 2 N sósavoldattal vasmentességig, desztillált vízzel pedig semlegességig mossuk és vákuumban szárítjuk. Az elválasztást szén-dioxid vedőgáz alatt, 7j5 liter mennyiségű, 2:5 arányú n-heptán/etil-acetát eleggyel végezzük; összesen 150, egyenként 50 ml mennyiségű frakciót gyűjtünk. A 115-145 frakciókból bepárlás után kb. 16,5 g menynyiségü, beigeszinü, üvegszerü anyagot kapunk, amelyből a 150 ml xilolból végrehajtott át kristályősit ás után kb. 12 g menynyiségü A-gvajakonsav keletkezik. Célszerű az egyes frakciókat vékonyrétegkromatográfiásan megvizsgálni, tekintettel arra, hogy bizonyos esetekben előfordulhat a kívánt anyag eluálásának eltolódása. Vékonyrétegkromatográfia: A lemezek: 60 F-254 jelzésű, Merck-gyártmányu szilikagél készárulemezek. A futtatószer: toluol/dioxén/jégecet /90:25:10/í % = 0,45. / Permetezőoldatok: Vízben oldott 0,05% peroxidázzál és 0,5% hídrogén-hipeíoxiddal az A-gvajakonsav kékre szineződik. Vízben oldott 6% formaldehiddel és 26% kénsawal ötperces melegítés után az A-gvajakonsav barnásibolyára, a szennyeződések pedig a pirostól az ibolyáig szineződnek. A fajlagos extinkció meghatározása: 4,0-mg A-gvajakonsavat feloldunk 400 ml 50%-os vizeá alkoholban. 1.0 ml-t ebből az oldatból, 0,5 ml-t Polivinilpilpirrolidon K 90 3%-os desztillált vizes oldatából, 1.0 ml 0,1 mólos vizes hidrogén-hiperoxid oldatot és 0,1 ml 1%-os torma-peroxidáz /1-2. 10* U/mg/ desztillált vizes oldatot desztillált vízzel 10 ml térfogatra egészítünk ki. A jól átkevert oldatot 5-10 perc múltán 1 cm-es küvettában, 600 nm-nél mérjük. 6
