180053. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiai minták tejsav-tartalmának meghatározására fotometriás úton
7 180053 és 1 térfogatrész 5. sz. oldat frissen készített keverékét adjuk hozzá. 30 perces várakozás után 580 — (610) — 620 nm-en, 10 mm rétegvastagság mellett, a vakmintával szemben leolvassuk a standard minta és a vizsgálandó minta extinkcióját, majd a standard minta tejsav-koncentrációjának ismeretében kiszámítjuk a vizsgálandó minta tejsav-tartalmát. 1. táblázat Oldatok Vizsgálandó minta Standard minta Vakminta Kiindulási elegy: Vér vagy liquor 0,1 ml — — 6. sz. oldat — 0,1 ml — Desztillált víz — — 0,1 ml Beadagolt oldatok: 1. sz. oldat A felül úszó 2,0 ml 2,0 ml 2,0 ml mennyisége 1,0 ml 1,0 ml 1,0 2. sz. oldat 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 3. sz. oldat 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml 4. + 5. sz. oldat 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml Megjegyezzük, hogy egyes esetekben — 800 mg/dl-nél nagyobb vércukorszint vagy 200 mg/dl-nél nagyobb karbamid-N-szint esetén — az 1. táblázatban feltüntetett 0,1 ml 2. sz. oldat nem elegendő az összes oxidálható komponens oxidálásához. Ekkor a mintához eleve 0,2 ml 2. sz. oldatot adunk. Ha a cérium(IV)-ionok jellegzetes sárga színe ekkor sem marad fenn (tehát a minta igen nagy mennyiségű oxidálható komponenst tartalmaz), további 0,1 ml 2. sz. oldatot adhatunk a mintához. Ennél nagyobb mennyiségben azonban a 2. sz. oldatot nem használhatjuk fel, mert a bevitt sav túlsavanyítja az elegy et, ami a színreakció szempontjából káros. Ekkor a vizsgálandó mintát ismert mértékben hígítanunk kell, és a meghatározást a hígított mintán kell elvégeznünk. Minthogy a vérmintában a vérvételt követően azonnal megindul az anaerob glikolizis, ami tejsav képződéséhez vezet, a meghatározás megbízhatósága szempontjából alapvető követelmény, hogy a fehérjéket a vérvétel után azonnal eltávolítsuk a vérmintából. A találmány szerinti analitikai eljárás megbízhatóságát ismert tejsav-tartalmú vérmintákon ellenőriztük. Az egyik vizsgálatsorozatban 5,1 mmól/1 névleges tejsav-tartalmú 031 60 34 sz. „Validate-N” kontroll szérumot (Gödecke AG) használtunk fel. Harminc mérés alapján a standard deviáció ±0,14 mmól/1 volt (Vk=2,71%). Egy másik kísérletsorozatban a fenti kontroll szérumhoz ismert mennyiségű tej savat tartalmazó 6. sz. oldatot adtunk, és ezután határoztuk meg a minta tejsav-tartalmát. Az észlelt eredményeket a 2. táblázatban közöljük. A 2. táblázatban feltüntetett mérési adatok három párhuzamos mérés középértékei. 2. táblázat Tejsav-tartalom, mmól/1 Alapérték Hozzáadott Névleges Talált mennyiség érték érték 2,55 1,0 3,55 3,45 5,10 1,0 6,10 6,20 5,10 2,0 7,10 7,05 5,10 3,0 8,10 8,00 5,10 4,0 9,10 9,25 5,10 5,0 10,10 10,15 A 2. táblázat adataiból megállapítható, hogy a találmány szerinti eljárás pontos és megbízható eredményeket szolgáltat. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás biológiai minták tejsav-tartalmának meghatározására tejsavból oxidációval kialakított acetaldehid mennyiségének fotometriás mérésével, azzal jellemezve, hogy az előzetesen fehérjementesített biológiai mintát perklórsav jelenlétében az összes oxidálódó komponenssel legalább egyenértékű mennyiségű cérium(IV)szulfáttal kezeljük, majd a képződött acetaldehid mennyiségét színreagenssel képezett vegyület vagy komplex formájában fotometriásan mérjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy az acetaldehid mennyiségét oxalil-dihidraziddal és réz(II)-ionokkal képezett sztöchiometrikus komplex extinkciójának mérésével határozzuk meg. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az acetaldehid mennyiségét oxalil-dihidraziddal és réz(II)-ionokkal képezett sztöchiometrikus komplexe alakjában mérjük, mégpedig olyan módon, hogy az oxidált biológiai mintához a bevitt cérium(IV)-ionokkal legalább egyenértékű mennyiségű trinátrium-citrátot és a meghatározandó acetaldehid mennyiségével legalább egyenértékű mennyiségű réz(II)-sót (célszerűen réz(II)-szulfátot) adunk, a kapott elegy pH-ját trietanolaminnal vagy dietanolaminnal 8 és 9 közötti értékre állítjuk, ezután vagy ezzel egyidőben az elegyhez a meghatározandó acetaldehiddel legalább egyenértékű mennyiségű oxalil-dihidrazidot adunk, végül az elegyet a színreakció kifejlődéséig állni hagyjuk. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a reagenseket desztillált vízzel készített oldatok formájában adjuk a mintához. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a trinátrium-citrátot és a réz(II)-sót közös reagens-oldat formájában adjuk a mintához. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
