180005. lajstromszámú szabadalom • Eljárás légúti betegségek kezelésére használható gyógyszer előállítására
nyésztjük oly módon, hogy az alaptápközeghez 0,3% glükózt és 0,5% lószérumq.t adunk. A tenyésztést az előbbi bekezdésben megadott körülmények között végezzük. A Streptococcus törzseket ugyancsak fermentorban tenyésztjük, mégpedig hasonló körülmények között, mint a Hemophilus törzseket. A tápközeghez 0,3% glükózt adunk. A Klebsiella törzsekét célszerűen szilárd tápközegben tenyésztjük Roux lombikokban. Az alaptápközeghez 0,2% zselatint és 2,4% gelózt adunk. A tenyésztést 37 °C-on végezzük 4? órán át. A Staphylococcus törzseket szintén szilárd tápközegben tenyésztjük az előző bekezdésben megadott körülmények között. Hasonló módon járunk el a Neisseria törzsek esetében is, amelyeket ugyancsak szilárd táp közegben tenyésztünk az előbbiekben megadott körülmények között. Abban az esetben, ha a baktériumok tenyésztését folyékony tápközegben végeztük, akkor az inkubálási idő végén a tenyészeteket törzsenként megszámláljuk. A számlálást opacimetriával vagy mikroszkóposán hajtjuk végre. Ezután a tenyészeteket centrifugáljuk, fiziológiás sóoldatban szuszpendáljuk, újra megszámláljuk, majd erőteljes lúgos lízisnek vetjük alá 9—10 pH értékben, 20 °C és 40 °C között változó hőmérsékleten. A lízishez használhatunk például nátrium- vagy káliumhidroxidot, primer, szekundér vagy tercier áminokat. A lízist 1—5 napig végezzük, miközben mikroszkóposán figyeljük az anyagot. A szilárd tápközegben tenyésztett kultúrákat a szokásos módszerekkel gyűjtjük össze. Az így kapott baktérium:$?tjs?penziókat törtenként megszámláljuk, azután a? éïôbhiek szeript lúgos lízisnek vetjük alá a baktériumokat. Minden egyes baktériumtörzs lizátumának „térfogatát a számjájás eredményének függvényében számítjuk ki. Az egyes baktériumtörzsek lízátumát a kivgnt arányban keverjük össze, amikor is a fentiekben meghatározott gyógyszerekhez jutunk. Á gyógyszerkészítéshez fçlhasçnàlhgtô baktérinigök ciírászáma .t>í?pnyos határok között változhat. így például Felnőtt grnbgmek napi egy beadásra szgnj dózis eseten a csíraszám 1—50 milliárdleíiét. Az előbbiek szerint előállított Uzátum felhasználásával különféle gyógyszerkészítményekét állíthatunk elő. így pékéül orális beadás céljára .kés?íthét„ünk tablettát, kemény es lágy zselatinkapszulát, granulátumot, amelyek a Jjzáturnot iíqfilizált alakban tartalmazzák. Készlthetünk azonban folyékony orális készítményeket is, így például egy dózisos ampullás készítményt, szirupot vggy cseppeket, amelyek a lizátumot tartalmazzák. Ké- SZitli^tijnk tqvahbá belégzés útján beadható gyógyszereket, igy például aeroszolokat vagy cseppeket, és parenterális úton beadható készítményeket isi A felnőtt ember napi dózisa célszerűen egyszerű beadással számolva annyi lizátumot tartalmaz, amely 1—50 milliárd csíraegységnek felel meg. A gyermekek dózisa a felnőttek dózisának a fe.le. Az alábbiakban közöljük a találmány szerinti készítmény hatásvizsgálatával kapcsolatos kísérleti eredményeinket. Vizsgálatainkhoz olyan lizátumot készítettünk liofilizált alakban, amely a fent felsorolt baktériumtörzsekből származott, és 6 milliárd csírát tartalmazott dózisonként. A lizátum hatását orális beadás esetén Balb/c fajtájú egereken vizsgáltuk, melyeket különféle fertőzéseknek tettünk ki. Az aktív védelem kísérleti létrehozására a humán dózis 1/5 részének megfelelő dózist 10 napon át adagoltuk orális úton 24 egérből álló csoportoknak. A gyógyszerrel való kezelés befejezése után 5, illetve 20 nappal megfertőztük az állatokat. Azt tapasztaltuk, „hogy a kezelés statisztikusan szignifikáns védelmet biztosított Klebsiella pneumoniae törzzsel szemben, ha e törzzsel a kezelés után 5 nappal intraperitoneáhsan fertőztük meg a kísérleti állatokat. Amikor a fertőzést a gyógyszeres kezelés befejezése után 20 nappal végeztük, még mindig csökkent a pusztulás mértéke. Azt tapasztaltuk továbbá, hogy az immunoterápiás hatású lizátum nem specifikus stimuláló hatást fejt ki a nátha vírusával szemben a védekező mechanizmusra, ami abban nyilvánult meg, hogy a nátha vírusával aeroszolosan megfertőzött állatok pusztulásának mértéke lecsökkent. A lizátummal a fentiek szerint kezelt Balb/c fajtájú egerekből származó mintákon elvégeztük a peritoneális makrofágok biokémiai és morfológiai vizsgálatát. Azt tapasztaltuk, hogy a „kezelés befejezése után 5, illetve 25 nappal jelentősen megnövekedett e sejtek száma és térfógáta. Foszfatáz és béta-galaktozidáz adagolásával megállapíthattuk azt is, hogy az enzimatikus aktivitás is fokozódik a kontrollokhoz képest. A lizátumok orális beadása után egereken megfigyeltük az IgA fokozódását a légutak mosófolyadékában. Ez abban nyilvánult meg, hogy pozitív kícsapódási reakciót tapasztaltunk az 1/16 hígítású megfelelő antiszéfummaj szemben. Tekintetteràz IgA s’zekcfó forrásának csekély arányára és a Ijzgtum hatására bekövetkező jelentős növekedésre az említett jnimnnqglobu- Jin-tíf!ussal kapcsolatSan, feltételezzük, hogy az lg teljes növekedése csaknem teljés egészében az IgA fokozódásának tulajdonítható. A tglálmáriy szerinti eljárással előállítható készítcnényt klinikailag is megvizsgáltuk. .12 önként jelentkező egészséges pácienst kezeltünk ÎÇ napig napi egy kapszulával, amely a fent felsorolt bak.tériurntqrz.sekhől szártnazqtt és 6 milliárd csírának megfelelő mennyiséget tartalmazott. A 3 hónapig és az után folytatott mintavételek alapján megállapíthattuk az IgA szekció statisztikusan szignifikáns növekedését a nyálban, és az IgA statisztikusan szignifikáns növekedését a széhimbam Ez az eredmény összhangban van az immunválasz mechanizmusról alkotott elképzeléseinkkel. 4z előbbi bekezôéshen meghatározott kapszulákkal vizsgálták a krónikus bronchítiszre kifejtett hatást, valamint a fül- orr- gége zónában, például a homíóküreggyulladásra kifejtett hatást. Kiértékeltük a gyógyszer kurativ és preventív hatását. A kezelést több hónapig folytattuk általában havonta 10 napig, elsősorban a téli hónapokban. Eredményeinket az alábbi táblázatban foglaljuk össze. 5 10 15 20 25 10 35 4C 45 50 55 60 65
