179936. lajstromszámú szabadalom • Leukociták testfolyadékokban való kimutatására szolgáló diagnosztikai eszköz és eljárás ehhez megfelelő kromogének előállítására
5 179936 6 jönnek számításba, amelyek pH-értékét és kapacitását úgy kell megválasztani, hogy a tesztcsíknak a testfolyadékba való bemártása után ezen 6—10, előnyösen 7—9 közötti pH-érték álljon be. Előnyös továbbá a leukociták testfolyadékokban való kimutatására szolgáló találmány szerinti diagnosztikai eszköz készítésénél adalékként tenzideket alkalmazni, mivel ezáltal rövidebb reakcióidők érhetők el. Előnyös kationaktív nedvesítőszereket, így például kvaterner ammonium-, piridinium- vagy imidazoliumsókat használni 0,05—2%, előnyösen 0,1—0,5% koncentrációban. A leukocitakimutatásra szolgáló diagnosztikai eszköz további alkotórésze lehet valamilyen megfelelő komplexképző. Előnyösen fémsókat, például a vas, réz, króm, kobalt, nikkel, mangán és cink sóit használjuk, amelyek a leukocita-észterázoknak az I általános képletű azoszínezék-észterekre való hatásakor keletkező o-hidroxiszínezékekkel színmélyülés közben megfelelő fémkelátkomplexokká reagálnak. Ezáltal rövidebb reakcióidők, és alacsonyabb kimutatási határok érhetők el. A komplexképzőket 10~4—10 1 mól/liter, előnyösen 10“3— 10“2 mól/liter koncentrációban adjuk az impregnáló oldathoz. A találmány szerinti diagnosztikai szer készítéséhez előnyösen szívóképes hordozókat, így például szűrőpapírt, cellulózt vagy műszálfilcet impregnálunk a szükséges, szokásosan a tesztcsíkok készítéséhez használatos reagensek (szubsztrát, puffer, adott esetben tenzidek, komplexképzők stb.) könnyen illő oldószerekkel, így például vízzel, metanollal, etanollal vagy acetonnal készült oldataival. Ez célszerűen két külön lépésben történik: Először egy olyan vizes oldattal impregnálunk, amely a puffert és a többi vízoldható alkotórészeket tartalmazza. Utána az I általános képletű észteráz-szubsztrátok oldatával impregnálunk. Különleges esetekben fordított impregnálási sorrend is alkalmazható. A kész tesztpapírok önmagukban is használhatók vagy ismert módon fogókra ragasztva vagy előnyösen műanyagok és finomlyukú hálók közé hegesztve a 2 118 455 sz. német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi leírás szerint. így olyan diagnosztikai eszközöket kapunk, amelyek a vizsgálandó testfolyadékba való bemártás után gyorsan és egyszerűen kiértékelhető módon színátcsapással mutatják a leukociták jelenlétét. Mivel a neutrofil leukocita-granulocitákban jelenlevő észterázok aktivitása a leukociták lízise után is teljesen megmarad, a találmány szerinti diagnosztikai eszközzel mind intakt mind lízist szenvedett leukociták kimutathatók. Lízis-hiba következésképp nem fordul elő. 1. példa Szűrőpapírt (például Schleicher & Schüll 23 SL) egymásután a következő oldatokkal impregnálunk, és utána 60 °C-on megszárítjuk. 1. oldat: Trisz(hidroxi-metil)-amino-metán 0,61 g, Desztillált víz körülbelül 30 ml, az oldatot 0,1 n sósavoldattal pH 7,0-re állítjuk, majd desztillált vízzel feltöltjük 100,0 ml-re. 2. oldat: Tiazol-2-azo-l'-{2'-[N-(benziloxi-karbonil)-L-alaniloxi]-naftalin} 46,1 mg, Aceton, kiegészítve 100,0 ml-re. így gyengén rózsaszín tesztpapírt kapunk, amely leukocitatartalmú vizeletbe merítéskor erősen vörösre színeződik. A kimutatási idő a következő; 10 000 leukocita/[i.l vizelet, körülbelül 1 perc; 5 000 leukocita/fj.1 vizelet, körülbelül 2 perc; 2 000 leukocita/pl vizelet, körülbelül 5 perc. A teszt érzékenysége körülbelül 2000 leukocita/txl. Hasonló tulajdonságokkal (érzékenység: 2000— 10 000 leukocita/p.1) rendelkező tesztpapírokat kapunk, ha tiazol-2-azo-l '-{2'-[N-(benziloxi-karbonil)-L-alaniloxi]-naftalin} helyett a következő szubsztrátokat használjuk, ahol a leukocitatartalmú vizeletbe való bemártáskor a tesztpapírokon az alább megadott színátcsapás észlelhető. 1.1. Tiazol-2-azo-2'-(l '-acetoxi-4'-metoxi-benzol). Színátcsapás: halvány rózsaszínből ibolyába. 1.2. Tiazol-2-azo-2'-{l '-[N-(benziloxi-karbonil)-L-alaniIoxi]-4 '-metoxi-benzol}. Színátcsapás: halvány rózsaszínből ibolyába. 1.3. Tiazol-2-azo-l '-(2',4'-diacetoxi-benzol). Színátcsapás: halvány rózsaszínből vöröses ibolyába. 1.4. TiazoI-2-azo-4'-{l ',3 '-di[N-(benziloxi-karbonil)-L-alaniloxij-benzol}. Színátcsapás: halvány rózsaszínből vöröses ibolyába. 1.5. Tiazol-2-azo-l '-(2'-acetoxi-naftalin). Színátcsapás: halvány rózsaszínből vörösbe. 1.6. Tiazol-2-azo-l '-{2'-[N-(terc-butoxi-karbonil)-L-alaniloxij-naftalin}. Színátcsapás: halvány rózsaszínből vörösbe. 1.7. Tiazol-2-azo-2'-)l '-acetoxi-naftalin). Színátcsapás: halvány rózsaszínből vöröses ibolyába. 1.8. Tiazol-2-azo-2'-{l '-[N-(benziloxi-karbonil)-L-alaniloxij-naftalin}. Színátcsapás: rózsaszínből vöröses ibolyába. 1.9. Tiazol-2-azo-l '-{2 '-lN-(benziloxi-karbonil)-L-alaniloxi]-7 '-(nátrium-szulfonáto)-naftalin }-dihidrát. Színátcsapás : rózsaszínből vörösbe. 1.10. 5-Bróm-tiazol-2-azo-l '-{2'-ÍN-(benziloxi-karbonil)-L-alaniloxi]-naftalin}. Színátcsapás: halvány rózsaszínből vörösbe. 1.11. Benzotiazol-2-azo-l '-{2'-[N-(benziloxi-karbonil)-L-alaniloxi]-naftalin}. Színátcsapás: rózsaszínből vörösbe. 1.12. Benzotiazol-2-azo-2'-{l '-[N-(benziloxi-karbonil)-L-alaniloxi]-naftalin}. Színátcsapás : halvány rózsaszínből vörösbe. 1.13. 6-Metoxi-benzotiazol-2-azo-2'-{l '-[N-(benziloxi-karbonil)-L-alaniloxi]-naftalin}. Színátcsapás : rózsaszínből vörösbe. 1.14. Piridin-2-azo-4'-{l ',3'-di[N-(benziloxi-karbonil)-L-alaniloxi]-benzol}. Színátcsapás: sárgás rózsaszínből vöröses ibolyába. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
