179926. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a gasztrin C-terminális tetrapeptid- szekvenciájának előállítására
5 179926 6 d) Nps-triptofanil-metionil-aszparaginsav-a-triklórfenilészter 7,0 g Nps-Trp-Met-OH.DCHA 150 ml jégecettel készített szuszpenziójához keverés közben 61 ml 0,2 n kénsavoldatot adunk. A szerves oldószeres fázist elkülönítjük, 50—50 ml vízzel háromszor mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk. A szűrletet szárazra pároljuk és a maradékot 25 ml tetrahidrofuránban oldjuk. Az oldathoz 1 ekvivalens trietil-amint adunk és az 10 oldatot —15 °C hőmérsékletre hűtjük le. Ezután a lehűtött oldathoz hozzácsepegtetünk 1 ekvivalens klórhangyasav-etilésztert és az elegyet hűtőfürdőben 10 percig keverjük. A fenti művelettel egyidejűleg 3,0 g Asp-OTcp.HCl 15 25 ml tetrahidrofuránnal készített oldatához 2 ekvivalens trietil-amint csepegtetünk és az elegyet szintén lehűtjük — 15 °C-ra. A két lehűtött oldatot egyesítjük és az elegy hőmérsékletét —15 °C-ról lassan szobahőmérsékletig hagyjuk emelkedni. Ennek során a reakció elő- 20 rehaladása a szén-dioxid-fejlődés ellenőrzésével követhető. Körülbelül 1 óra múlva szén-dioxid-fejlődés már nem tapasztalható, ekkor a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk. Maradékként sárgás olajat kapunk, ezt etil-acetátban oldjuk. Az etil-acetátos oldatot n sósavoldat- 25 tál, majd vízzel mossuk, azután vízmentes magnézium-szulfáttal szárítjuk és leszűrjük. A szűrletet bepároljuk, a kapott sárga színű maradékot kevés etil-acetátban oldjuk és hideg petroléter hozzáadása útján leválasztjuk az Nps-triptofanil-metionil-aszparaginsav-oc-triklórfenil- 30 észtert, amely 95—102 °C-on olvad; Rf (butanol, jégecet és víz 4: 1: 1 arányú elegyében) : 0,92. Hozam: 6,43 g (79,9%). e) Nps-triptofanil-metionil-aszparagil-fenilalanin-amid 0,390 g (0,5 mmól) Nps-triptofanil-metionil-aszparaginsav-a-triklórfenilészter 25 ml dimetil-formamiddal készített oldatához +5 °C hőmérsékleten, keverés köz- 40 ben hozzácsepegtetjük 0,082 g fenilalanin-amid ugyancsak dimetil-formamiddal készített oldatát. A reakcióelegyet hűtőszekrényben, +5 °C hőmérsékleten 3 napig állni hagyjuk, majd 20 ml jeges víz és 10 ml ciklohexán elegyébe öntjük. Az elegyet 20 percig keverjük, majd a 45 képződött csapadékot leszívatással leszűrjük. Az így kapott nyers terméket megszárítjuk, 50 ml forró etanolban oldjuk, majd lehűlés után éjjelen át hűtőszekrényben állni hagyjuk. Eközben kristályos alakban kiválik az Nps-triptofanil-metionil-aszparagil-fenilalanin-amid, amely 120—125 °C-on olvad; Rf (butanol, jégecet és 5 víz 4: 1: 1 arányú elegyében): 0,70. Hozam: 0,34 g (88%). f) Triptofanil-metionil-aszparagil-fenilalanin-amid 0,389 (0,52 mmól) Nps-triptofanil-metionil-aszparagil-fenilalaniTi-amidot 50 ml dimetil-formamidban keverés közben oldunk, majd 0,136 g (1,04 mmól) 2-metil-indolt és 0,078 g (1,04 mmól) ammónium-rodanidot adunk az oldathoz. Az elegyet szobahőmérsékleten 3 óra hosszat keverjük, majd az oldószert vákuumban elpárologtatjuk és a kapott maradékot a teljes elszíntelenedésig éterrel kezeljük. Az így kapott maradékot azután igen híg ammónium-hidroxid-oldattal, majd vízzel eldörzsöljük, azután 1 ekvivalens trifluor-ecetsavat csepegtetünk hozzá és foszfor-pentoxid felett 1 Torr nyomáson megszárítjuk. Ily módon kristályos alakban kapjuk a stabil triptofanil-metionil-aszparagil-fenilalanin-amidot, amely 200—210 °C-on olvad. [«]g’=-24,0e (c=l, dimetil-formamidban). Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás a gasztrin C-terminális tetrapeptid-szekvenciájának előállítására, azzal jellemezve, hogy kiindulási anyagként Nps-triptofanil-metionin-metilésztert alkalmazunk, ehhez aszparaginsav-triklórfenilésztert kapcsolunk, majd a kapott terméket fenilalanin-amiddal 35 kapcsoljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az Nps-triptofanil-metionin-metilészter kiindulási vegyületet a diciklohexil-karbodiimides kapcsolási módszerrel állítjuk elő, az aszparaginsav-triklórfenilészter kapcsolását a vegyes anhidrides módszerrel végezzük és zárólépésként a fenilalanin-amid kapcsolását az aktivált észteres módszerrel folytatjuk le. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az Nps-védőcsoport lehasítását ekvimolekuláris mennyiségű ammónium-rodaniddal, 2-metil-indol hozzáadásával folytatjuk le. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 84.607.66-4 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: BenkŐ István igazgató
