179788. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új karbapeném-származékok előállítására
7 179788 8 7. Infravörös (IR) abszorpciós spektrum A PS—7 antibiotikum (nátrium-só) jellemző infravörös abszorpciós maximuma káliumbromid tabletta alkalmazásával történő mérés alapján a következő: 1760 cm'1 (a ß-laktäm gyűrű —CO— csoportja) 1670 cm“1 (amid —CO— csoportja) 1620 cm“1 (—COO® és —CH CH— csoportja) 8. Proton magmágneses rezonancia (Proton NMR) spektrum A PS—7 antibiotikum (nátrium-só) a következő jellemzőket mutatja a 100 MHz-es proton magmágneses rezonancia spektrumon, melyet nehéz vízben (D20) mérünk : (i) triplett, melynek központja 0,96 ppm-nél van (ch3—ch2—) (ii) multiple», melynek központja 1,72 ppm-nél van (—ch2 ch3) (iii) éles szingulett 2,05 ppm-nél (CH3—CO—) (iv) multiple» 2,96—3,38 ppm-nél (—CH2—CH—) (v) szingulett, melynek központja 3,96 ppm-nél van (vi) két dup ett, melyek központja 6,02 és 7,10 ppmnél van (J=körülbelül 14 Hz) (—CH=CH—) 9. Molekulasúly Körülbelül 296 (a PS—7 antibiotikum metil-észterének tömegspektrumából kapott eredmények alapján számítva). 10. Színreakciók Ehrlich-reagens reakció : pozitív Jód-klórplatinasav reakció: pozitív Ninhidrin-reakció: negatív 11. Oldhatóság A PS—7 antibiotikum oldódik 6—9 pH értékű vízben, gyakorlatilag oldhatatlan benzolban, acetonban és etilacetátban. A fenti fizikai-kémiai jellemzők alapján nyilvánvaló, hogy a (2), (4), (6)—(10) képletű csoportok vannak jelen a PS—7 antibiotikum (nátrium-só)-ban. Ezeknek az adatoknak az alapján a PS—7 antibiotikumnak az (Ib) képletnek megfelelő szerkezete van. A PS—7 antibiotikum biológiai tulajdonságai 1. Antibiotikus hatásspektrum A PS—7 antibiotikum széles spektrumú mikrobaellenes hatással rendelkezik. Sok mikroorganizmussal szemben fejt ki nagymértékű mikrobaellenes hatást, például a Staphylococcus vagy Diplococcus nemzetségbe tartozó Gram-pozitív baktériumokkal szemben, valamint például az Alcaligenes nemzetségbe tartozó Gram-negatív baktériumokkal szemben. A PS—7 antibiotikum különösen a Citrobacter vagy Enterobacter nemzetségekbe tartozó Gram-negatív baktériumokkal szemben mutat fel nagymértékű mikrobaellenes hatást, melyek ellenállóak az ismert ß-laktäm antibiotikumokkal szemben. 2. Más antibiotikumok ß-laktamäz-termelö baktériumokkal szembeni antibiotikus hatásának növelése A PS—7 antibiotikum más, például ß-laktäm antibiotikumok, mint például cefalosporinok mikrobaellenes hatását növelni képes ß-laktamäz-termelö baktériumokkal, mint például Proteus vulgaris vagy Serratia marcescens, szemben. 3. In vivo hatás Az antibiotikum patogén Gram-pozitív baktériumokkal fertőzött egerek esetén terápiás hatást fejt ki. 4. Toxicitás Egereknél 500 mg/kg mennyiségben intraperitoneálisan alkalmazva akut toxicitás nem jelentkezik. A találmány szerinti eljárással a fenti tulajdonságokkal rendelkező PS—6 és/vagy PS—7 antibiotikumokat ezeknek az antibiotikumoknak termelésére képes mikroorganizmusok tápanyagot tartalmazó táptalajon történő tenyésztésével, majd ebből történő izolálásával állíthatjuk elő. A találmány szerint alkalmazott, PS—6 és PS—7 antibiotikumok termelésére képes mikroorganizmusok képesek vagy csak az egyik, vagy mindkét antibiotikum termelésére. A PS—6 és PS—7 antibiotikumok termelésére képes mikroorganizmusok jellegzetes képviselői a Streptomyces nemzetségbe tartoznak. Erre a célra a legmegfelelőbb a Streptomyces nemzetségbe tartozó No. A271 törzs, melyet Japánban, Fukui Prefecture Yoshida megyéjében levő Eiheiji Temple közelében összegyűjtött talajmintából izoláltunk. Ez a törzs mind a PS—6, mind a PS—7 antibiotikum termelésére képes, és a találmány szerinti eljárásban előnyösen ezt alkalmazzuk. Az A271 törzs taxonómiai tulajdonságai A Streptomyces A271 törzs taxonómiai tulajdonságai az alábbiak : 1. Morfológiai jellemzők A spórás aerial mycelium elágazása: egyszerűen elágazott. A spórás aerial mycelium alakja: az aerial mycelium felső részén éles kanyarok, hurkok vagy nem teljes spirálok figyelhetők meg. Ennek alapján a törzs a Retinaculum-Apertum csoportba tartozik. Ezeket az alakzatokat különösen akkor 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6,5 4
