179788. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új karbapeném-származékok előállítására
27 179788 28 Nátriumklorid Kálium-hidrogénfoszfát Magnéziumszulfát Kalcium-karbonát Kobaltklorid 0,5% (süly/térfogat) 0,05% (súly/térfogat) 0,05% (súly/térfogat) 0,3% (súly/térfogat) 0,00013% (súly/térfogat) a sterilizálás előtt a pH=7,0 A PS—6 antibiotikum kimutatása 1,5 ml Diaion HP—20-t (ioncserélő, Mitsubishi Chemical Industries Co.) tartalmazó mini-oszlopon eluáljuk a centrifugálást tenyésztési táptalaj felülúszójának 10 ml-ét. Az aktív komponensek abszorpciója után az elúciót vizes aceton-oldattal (50%-os, térfogat/térfogat) végezzük. Az első 0,5 ml eluátumot félretesszük és az ezt követő 2 ml eluátumot összegyűjtjük. Az eluátumot koncentráljuk, majd a koncentrált eluátum 20 [lányi mennyiségével szűrőpapíton (Toyo Roshi No. 50, Toyo Roshi Kaisha) leszálló papírkromatográfiás vizsgálatot végzünk. A kromatogramot 5 °C hőmérsékleten 7—20 órán keresztül fejlesztjük ki különböző oldószerekben. A kromatogram kifejlesztése után a még nedves szűrőpapírt különböző mikroorganizmusokat tartalmazó bioautográfiai vizsgálati lemezre tesszük 15—30 percre. A szűrőpapírt ezután elvesszük és a vizsgálati lemezen történő tenyésztést 30 °C hőmérsékleten mintegy 18 órán keresztül végezzük. A PS—6 antibiotikumot tartalmazó minta a PS—6 antibiotikumnak megfelelő Rf értéknél ad gátló zónát. Ezzel a módszerrel a PS—6 antibiotikum a fenti 6 táptalaj tenyésztési táptalajában kimutatható. A PS —7 antibiotikum kimutatása 1,5 ml Diaion PA—306-t (Mitsubishi Chemical Industries Co.) tartalmazó mini-oszlopra felvisszük a tenyésztési táptalaj centrifugálása után kapott felülúszó 10 ml-ét. Az oszlopot 0,5 ml 5%-os (súly/térfogat) nátriumklorid-oldattal mossuk, majd 50%-os (súly/térfogat), 3% (súly/térfogat) nátriumkloridot tartalmazó metanolos oldattal eluáljuk. Az eluátum első 1,0 ml-ét félretesszük és az ezt követő 5,0 ml eluátumot összegyűjtjük. Az eluátumot a metanolnak csökkentett nyomáson történő eltávolítása után 1,5 ml Diaion HP—20-t (Mitsubishi Chemical Industries Co.) tartalmazó minioszlopra visszük. A gyantán adszorbeálódott aktív komponenst 50%-os (térfogat/térfogat) aceton-oldattal eluáljuk. Az első 0,5 ml eluátumot félretesszük és az ezt követő 2,0 ml eluátumot összegyűjtjük. Az eluátumot koncentráljuk és a kapott koncentrátum 20 [i.l-ét rávisszük Toyo Filter Paper No. 50-re (Toyo Roshi Co.). A leszálló papírkromatográfiás vizsgálatot különböző oldószerekkel végezzük 5 °C hőmérsékleten 7—-20 órán keresztül. A kromatogram kifejlesztése után a félig száraz kromatogramot 15—20 percig különböző mikroorganizmusokat tartalmazó bioautográfiai vizsgálati lemez agar-felületével hozzuk érintkezésbe. A vizsgálati lemezeket 35 °C hőmérsékleten 18 órán keresztül inkubáljuk. A PS—7 antibiotikumot tartalmazó minta gátló zónája a PS—7 antibiotikum Rf értékének megfelelő helyen fejlődik ki. A fentiek szerint elvégzett vizsgálat alapján mind a négyféle táptalaj alkalmazása esetén kimutatható a táptalajszűrletben PS—7 antibiotikum. Az összegyűlt antibiotikum mennyisége a táptalajtól függően különböző. 2. példa A Streptomyces sp. A271 törzset az 1. példában leírtakkal analóg módon tenyésztjük, azzal az eltéréssel, 5 hogy az alább megadott összetételű AGB—42 táptalajt használjuk. A tenyésztés megkezdése előtt vagy 24 órával utána, hozzáadunk a táptalajhoz 0,2% DL-valint vagy L-valint. A tenyészetet 72 órán keresztül rázzuk. Az összegyűlt PS—6 antibiotikum mennyisége négy- 10 szerese annak a mennyiségnek, mely akkor gyűlik össze, ha a táptalajhoz nem adunk valint. AGB—42 táptalaj összetétele 15 Maltóz Oldható keményítő Glicerin Száraz élesztő Nátriumklorid 20 Kálium-hidrogénfoszfát Magnézium-szulfát Kalcium-karbonát Kobaltklorid 25 3. példa A Streptomyces sp. A271 törzset az 1. példában leírtakkal analóg módon tenyésztjük, azzal az eltéréssel, 30 hogy a fenti összetételű ML—19 táptalajt használjuk. A tenyésztés megkezdése előtt vagy 24 órával utána, hozzáadunk a táptalajhoz 0,2% DL-valint vagy L-valint. A tenyészetet 72 órán keresztül rázzuk. A táptalajban összegyűlt PS—6 antibiotikum mennyisége négysze- 35 rese annak a mennyiségnek, mely akkor gyűlik össze, ha a táptalajhoz nem adunk valint. 4. példa 40 A Streptomyces sp. A271 törzs tenyésztését a 3. példában leírtakkal analóg módon végezzük, azzal az eltéréssel, hogy DL- vagy L-valin helyett DL- vagy L-leucint adunk a táptalajhoz. A tenyészetet 72 órán keresz- 45 tül rázzuk. Az összegyűlt PS—6 antibiotikum mennyisége kétszerese annak a mennyiségnek, mely akkor gyűlik össze, ha a táptalajhoz nem adunk leucint. 50 5. példa A Streptomyces sp. A271 törzs tenyésztését az 1. példában leírtakkal analóg módon végezzük, azzal az eltéréssel, hogy az alábbi összetételű AGB—3 táptalajt 55 használjuk. A tenyésztés előtt 0,1% L-valint és 0,3% L-Ieucint adunk a táptalajhoz. A tenyészetet 72 órán keresztül rázzuk. A táptalajban jelentős mennyiségű PS—6 antibiotikum gyűlik össze. 60 Az AGB—3 táptalaj összetétele Maltóz 3,0% (súly/térfogat) Száraz élesztő 2,0% (súly/térfogat) Nátriumklorid 0,5% (súly/térfogat) 65 Kálium-hidrogénfoszfát 0,05% (súly/térfogat) 5,0% (súly/térfogat) 1,0% (súly/térfogat) 0,3% (súly/térfogat) 3,0% (súly/térfogat) 0,5% (súly/térfogat) 0,05% (súly/térfogat) 0,05% (súly/térfogat) 0,3% (súly/térfogat) 0,00013% (súly/térfogat) 14
