179778. lajstromszámú szabadalom • Reagens készítmények, eszköz és eljárás ketontestek kimutatására
5 179778 6 val, így CaCl2-vel és különösen MgS04-el együtt. Ugyancsak erre a célra használható sók például az MgCl2, MgBr2, Mg(C104)2.6 H20, Mg(N03)2.2 H20, Mg(N02)2.3H20, CaS04, Ca(Br03)2.H20, Ca(C103)2, Ci(C10)2 és a Ca(HS03)2. Egynél több fémsó is lehet a készítményben, az MgS04 és CaCl2 kombinációja különösen előnyös. Előnyös nitroprusszidok az oldható nitroprusszidsók, így a nitroprusszid alkálifémsói, például a nitroprusszíd-nátrium vagy -kálium. Azt találtuk, hogy ezeknek a fémsóknak a jelenléte számos meglepő hatást eredményez. Ilyen hatások az oldható nitroprusszidok stabilizációja vizes oldatban alkalikus pH-n, a ketontestek ionizációjának a megkönnyítése és a keletkező kromofór-komplexek stabilizációja. Ezenkívül egy alkalikus pH-jú oldatokat alkalmazó egylépéses módszert alakítunk ki olyan eszközök készítésére, amelyek az említett alkalikus pH-n használhatók. Úgy véljük, hogy ezek az előre nem várható tulajdonságok és előnyök a B) reakcióvázlaton bemutatott mechanizmus eredményei, jóllehet nem ez az elmélet, amelyen a találmány alapszik. Az ábrák egyeznek Cotton és Wilkinson: Advanced Inorganic Chemistry John Wiley and Sons (1962) munkájában szereplő nómenklatúrával és ábrákkal. Ezenkívül más előnyös tulajdonságokat is megemlítünk, amelyek az erre a célra alkalmas tesztek tulajdonságait messze felülmúlják. Ezek az előnyök abban mutatkoznak, hogy megnövekszik a stabilitása hő és nedvesség behatásával szemben, csökken a megkülönböztetéshez szükséges idő, nagyobb lesz az érzékenység kisebb ketontest-koncentrációk esetében, mint az eddigi meghatározásoknál, nagy mértékben javul a szín minősége és jobb meghatározás válik lehetővé, továbbá jelentős gazdasági előnyök mutatkoznak az alkalmazott anyagok olcsósága miatt. Erre vonatkozó összehasonlító számítások jelentek meg a Chemical Marketing Reporter 1977. szeptember 19-i számában és példákkal támasztják alá a többi előnyös tulajdonságot is. A találmány szerinti reagenskészítményben alkalmazott fémsók lényegében nem mérgezőek és nincs rákkeltő hatásuk. így például Christensen előbb említett munkájában megadott legkisebb dózis lethalis magnéziumszulfátra (amelyet a magyar szóhasználatban keserűsónak, az amerikai gyógyászatban Epsom-sónak neveznek) 750 mg/kg intravénásán kutyának befecskendezve. Intraperitoneális és szubkután beadásnál az LDlo ennek több, mint a kétszerese kutyánál. Az LD50- re nincsenek adatok e vegyület esetén. Egy 2800 mg/kg nagyságú egyetlen LD50 adagról történik említés magnéziumkloridra orálisan beadva patkányoknak. Kalciumkloridra patkányoknál az LD50 100 mg/kg (orálisan), az LDlo 500 mg/kg (intraperitoneálisan) és 161 mg/kg (intravénásán). Ezek a jellemzők éles ellentétben állnak más fémsók, így az előzőekben tárgyalt fémsók megfelelő jellemzőivel. Egy más előnyös változatban a reagenskészítmény legalább egy primer amint tartalmaz. Egy előnyös primer amin típus elsősorban az aminosavak közül kerül ki. Más előnyös aminok az etiléndiamin, pikolilamin(2-aminometil-piridin és 3-aminometil-piridin), m-aminofenol és a szemikarbazid. Az aminometánszulfonsav, szulfanilsav, ciszteinsav, ciklohexilamin és a piridoxarún csoportba tartozó vegyületek szintén kielégítően használhatók. Ilyen primer aminok kombinációi, például az aminomeíánszulfonsav és a piridoxamin ugyancsak előnyösen alkalmazhatók. Azt ta'áltuk, hogy ezeknek a primer aminoknak az adagolása nem várt kedvező előnyöket biztosít. Felismertük többek között, hogy ketontestek és egy primer amin reakciójánál keletkező Schiff-bázisok szinerget kus hatásúak a találmány keretében említett fémsókkal való kombinációban, így nagyon érzékeny ketontcs'.-kimutató tesztet biztosítanak viszonylag kis mennyiségű anyagok esetén is. Optimális színkialakulás megy végbe, ha az aktív amin piotonos és szabad formája mólegyenértékű koncentrációban van jelen. Ezért olyan primer amin kiválasztása előnyös, amelynek a pKa értéke egyenlő azzal a pH-val, amelyen a tesztet végezzük. A keletkező kék szír és az azt létrehozó kromofór-komplexek, ellentétben vannak a vörös szín kialakulásával, amely a nitroprusszid-nátrium és fémsókészítménynek a ketontestekhez való hozzáadásánál keletkezik nitrogénforrás távollétében. Ezenkívül az oldható nitroprusszidreakciónak szervetlen magnézium- vagy kalciumsók adagolása útján való katalizálása e fémsók aldehid- és ketonrészekre gyakorolt közvetítő hatása előnyösen alkalmazható a nitroprusszid-tesztek területén azáltal, hogy a fémsók a primer aminokkal fémkomplexeket képeznek, ahogy az (I) képlet mutatja, ahol a fém két szomszédos egyenrangú helyzetét a kar'oonil-csoport és a primer amin foglalja el. Egy fémion körül ilyen szilárd konfigurációban tartott két reaktív csoportnak ilyen szomszédsága lehetővé teszi, hogy a fémion elektrongyűjtőként működjék és megkönnyíti ezek vízkilépés közben végbemenő Schiff-bázisképző reakcióját. Úgy 'éljük, hogy egy Schiff-bázis képződése során, amely egy aminosav, aminosavanalóg vagy bizonyos más primer aminok és acetecetsav vagy acetoacetát között négy végbe, a fémsóval nagyon szilárd, de igen hatásos kétszer háromfogú komplex alakul ki, amelyet a (II) képlet ábrázol. Olyan teszt-eszközöket is készítünk, amelyek a találmány szerinti készítményt foglalják magukban. A találmány tehát reagenstartalmú teszt-eszközök egybemártós készítésére is kiterjed, amely abban áll, hogy valamely vivőanyagot, így mátrixot vagy tablettát, nitroprusszid és szervetlen magnézium- vagy kalciumsó, vag> fémsó és primer amin kombinációjával kezelünk. A^ban az esetben, ha az érintkeztetést úgy végezzük, hegy a vivőanyagot a találmány szerinti készítmény o datával impregnáljuk, akkor az így impregnált vivőanyagot szárítjuk. Az egybemártós eljárás során felhasználásra kerülő oldatok készítésénél oldószerként vizet, fiziológiás oldatokat és szerves oldószereket használunk vagy ezek elegyeit alkalmazzuk. Magi az oldat vagy a találmány szerinti készítményt tartalmazó tabletta használható ketontestek kimutatására testfolyadékokban, így vizeletben, plazmában vagy szérumban. Színváltozás közben a kromofórkomplex képződése megtörténik, a készítmény azonban előnyösebben használható szilárd eszköz alakjában, mint maga az oldat. Sziláid készítmények, ahogy később leírjuk, előnyösen valamely vivőanyagban beágyazva szalag formájában lészülnek. A teszt-eszközt előnyösen úgy hasz5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
