179726. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sejtfalvázat tartalmazó szilárd gyógyszerkészítmények előállítására
7 179726 8 Daganatsejtekkel szembeni direkt citotoxicitás: Amint a II. táblázatból látható, N. rubra-SVF-t tartalmazó egyik vizsgált készítmény sem citotoxikus, ha az adjuvánsokat és a daganatsejteket (BALB/c egerek Meth A tumorsejtjeit) jeges vízfürdőben tartjuk 60 percig, de a szkvalénből és 0,2% Tween—80-at tartalmazó 0,9%-os sóoldatból álló liofílizált készítmény némi daganatpusztító hatást mutat. A frissen előállított készítmény hasonló körülmények között nem citotoxikus. A szkvalénmannittal kezelt, liofílizált N. rubra-SFV készítmény azonban nem citotoxikus. N. rubra olajhoz kötött SFV-jének tumorgátló hatása: Szkvalénnel, szkvalánnal vagy Drakeol 6 VR-rel kezelt és 0,2% Tween—80-at tartalmazó 5,6%-os mannitoldatban szuszpendált N. rubra-SVF daganatgátló hatását vizsgáltuk szüngén egerekbe transzplantált tumorokon. A III., IV., V. és VI. táblázat értelmében a különféle olajokkal kezelt N. rubra-SFV készítmények közel azonos mértékben gátolják szüngén egerekbe átvitt EL—4 leukémia, Meth A és MC104 daganatok növekedését. Amint a III. táblázatból látható, az N. rubra- SFV-nek Meth A növésére kifejtett gátló hatása BALB/c egérnél nem különbözik frissen előállított Drakeolsóoldatos készítmény és szkvalén-mannittal vagy szkvalán-mannittal kezelt liofílizált és steril vízben használat előtt szuszpendált készítmények esetében. Olajkészítmény hatása a késői típusú hiperszenzitivitásra tengerimalacnál: N. rubra-SFV-t olaj (mint Drakeol 6VR, szkvaién vagy szkvalán) és Arlacel C 85 : 15 arányú keverékében szuszpendálunk. ABA-N-acetil-tirozin oldatot elkeverünk a fenti SFV-szuszpenziókkal, vagy SFV-t nem tartalmazó víz-az-olajban emulzióval. Tengerimalacokat a fenti adjuváns/antigén keverék intramuszkuláris injekciójával immunizálunk. Két hét múlva ABA-BaA antigénnel bőrpróbát végzünk és a bőrreakciót a teszt-antigén intradermális injekciója után 24 és 48 óra múlva értékeljük. A VII. táblázat értelmében az ABA-BaA-val szemben pozitív bőrreakció figyelhető meg azoknál a tengerimalacoknál, melyeket ABA-N-acetil-tirozinnal és szkvalénnel, szkvalánnal, valamint Drakeol 6VR-rel kezelt N. rubra-SFV víz-az-olajban emulzióval együtt immunizáltunk. A kísérleti adatokat a következő táblázatok mutatják. I. táblázat Olajhoz kötött N. rubra-SFV hatása masztocitoma P815—X2 daganatsejtekkel szembeni, sejt közvetítette citotoxicitásra C57BL/6J egereknél Egerek immunizálása az alábbi anyagokkal Specifikus „célsejt*Mízis (°/o) t. kísérlet. 2. kísérlet. Masztocitoma P815—X2 sejtek (1 x 104) +N. rubra-SFV-szkvalén-mannit 64,2 41,1 + N. rubra-SFV-Drakeol 6VR- mannit 58,3 +N. rubra-SFV-szkvalén-sóoldat 50,4 — +N. rubra-SFV-Drakeol 6VR-sóoldat 26,9 28,4 +Szkvalén-mannit 8,2 14,1 +Drakeol 6VR-mannit — 8,7 +Szkvalén-sóoldat 2,3 — + Drakeol 6VR-sóoldat 0,7 16,8 Masztocitoma P815—X2 sejtek (3 x 107) egyedül 87,9 67,5 Megjegyzés: Mindkét csoportban 3 egeret masztocitoma-sejtek és olajhoz kötött N. rubra-SFV keverékével intraperitoneálisan immunizálunk. 11 nap múlva immunizált egerek lépsejtjei és 51Cr-mal jelzett masztocitomasejtek 100: 1 keverékével 20 óráig inkubálva meghatározzuk a sejt közvetítette citotoxicitást. Minden próbát párhuzamosan végzünk el. aFrissen készített adjuvánsokat használunk. Liofílizált anyagokat sterilezett víz hozzáadásával használat előtt újraszuszpendálunk. II. táblázat Olajhoz kötött N. rubra-SFV daganatsejtekre (Meth A) gyakorolt direkt citotoxicitása in vitro T umorsejtek elkeverése az alábbi anyagokkal N. rubra- SFV koncentráció mg/ml Túlélési, % frissen készült liofilizilt N. rubra SFV-szkvalénmannit 2 90,0 89,7 0,4 88,8 85,0 N. rubra SFV-szkvalén-2 92,3 87,0 sóoldat 0,4 87,9 91,7 N. rubra SFV-Drakeo! 6VR-2 86,7 85,8 sóoldat 0,4 86,4 84,7 Olajcseppecskék Szkvalén-mannit — 83,3 87,1 Szkvalén-sóoldat — 75,7 45,5 Drakeol 6VR-sóoldat — 87,1 79,1 MÉM — 100 100 Megjegyzés: Tumorsejt (Meth A, BALB/c egérből) szuszpenziót (4x107 sejt per ml MÉM) olajhoz kötött N. rubra SFV-vel vagy olajcseppecskékkel keverünk össze, jeges vízfürdőn tartjuk 60 percig, majd eozin Y festéssel meghatározzuk a túlélő tumorsejtek arányát, összehasonlítva a MEM-oldatban levő élő daganatsejtekkel. III. táblázat Olajhoz kötött N. rubra-SFV tumorgátló (Meth A tumor elleni) hatása BALB/c nőstény egereknél Készítmények Frissen előállított . Liofilizált. N. rubra SFV (100 p.g) az alábbi anyagokkal kezelve: Szkvaién 10/10 9/10° Szkvalán 9/10 10/10 Drakeol 6VR 10/10 — Kontroll (olajcseppecskék) Szkvaién 0/10 0/10 Szkvalán 0/10 0/10 Drakeol 6VR 0/10 — Megjegyzés: Daganatsejtek (Meth A, 2x 105) és 100 ;j.g olajhoz kötött N. rubra-SFV vagy olajcseppecskék keverékét intradermálisan nőstény BALB/c egerekbe oltjuk be. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
