179677. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-N-(omega-amino-alfa-hidroxi-alkanoil)-kanamicin-származékok előállítására
11 179677 12 Az eluátum minden frakciójának térfogatát, észlelt optikai forgatását, valamint az egyes frakciókból bepárlással izolált szilárd anyag súlyát és %-os kitermelését az alábbiakban összegezzük: Anyag Térfogat, ml “578 Súly, g Kitermelés, °/o Kanamicin A 1000-0,115 0,989 9,15 BB—K29 1750 +0,24 4,37 32,0 Amikacin 2000 +0,31 6,20 47,4 Poiiacilok 900 + 0,032 0,288 2,0 Az elválasztott dietil-keton-fázisból nagy teljesítményű folyadékkromatográfia segítségével további 3—5% amikacint nyerünk ki. A nyers amikacint (6,20 g) 20 ml metanollal hígított 20 ml vízben oldjuk és 20 ml izopropanolt hozzáadva kristályosítjuk. 6,0 g (45,8%) kristályos amikacint kapunk. 2. példa l-N-[L-(—)-y-Amino-a-hidroxi-butiril]-kanamicin A (amikacin) előállítása poli(trimetil-szilil)-6'-N-karbobenzil-oxi-kanamicin A vízmentes acetonban történő szelektív acilezéséve! Az 1. példa szerint előállított poli(trimetil-szilil)-6'-N-karbobenzil-oxi-kanamicin A-t [103 g, 0,081 mól, 6'-N-karbobenzil-oxi-kanamicin A (szilil)9-ként számítva] 23°-on feloldunk 100 ml vízmentes acetonban. L-( - )-y-benzil-oxi-karbonil-amino-a-hidroxi-vajsav-N-hidroxi-5-norbornen-2,3-dikarboximid-észtert (NAE) (35,24 g, 0,085 mól) 23c-on 180 ml vízmentes acetonban oldunk és erős rázás közben, 23°-on, 15 perc alatt lassan hozzáadjuk a poli(trimetil-szilii)-6'-N-karbobenzil-oxi-kanamicin A oldathoz. Az oldatot 23°-on nitrogénatmoszférában 20 óráig keverjük. A halványsárga, tiszta oldatot (pH 7,2) 100 ml vízzel hígítjuk. A keverék pH-ját 2,5-re állítjuk be (3n HC1) és a keverést 23°-on 15 percig folytatjuk. Az acetont gőzejektor-vákuumban körülbelül 35°-on eltávolítjuk. Az oldatot 500 ml-es Parr-palackba töltjük 10 g 5% Pd/C katalizátorral (Engelhard) együtt és 2,8 kg/cm2 H2-nyomásnál 2 óráig 23°-on redukáljuk. A keveréket diatómaföld-szűrőn átszűrjük és a szűrőt még 50 ml vízzel átmossuk. Az oldatot térfogatának mintegy 1/3-ára bepároljuk (pH 6,9—7,2) és 6 x 110 ernes CG—50 (NH4+) ioncserélő oszlopra visszük fel, és víz — 0,6n NH4OH folyamatos gradienssel eluáljuk az amikacin kinyerése céljából. Automata poliariméter segítségével követjük az elúció lefolyását. A frakciókat vékonyréteg-kromatográfiás értékelés alapján egyesítjük. Az egyesített amikacinfrakciókat 25—30% szilárd anyag képződéséig koncentráljuk. Kristályosítás céljából az oldatot azonos térfogatú metanollal, majd 2 térfogat izopropanollal hígítjuk. 18,2 g (40%) kristályos amikacint, továbbá 12% kanamicin A-t, 40% BB—K29- et és 5% poliacilezett kanamicint kapunk. l-N-[L-(—)-y-Amino-a-hidroxi-butiril]-kanamicin A (amikacin) előállítása poli(trimetil-szilil)-kanamicin A szelektív aciiezésével, in situ blokkolást alkalmazva 3. példa A) Poli(trimetil-szilil)-kanamicin A Kanamicin A szabad bázist (18 g, 37,18 millimól) 200 ml vízmentes acetonitrilben szuszpendálunk és viszszafolyásig melegítünk. 30 perc alatt hexametil-diszilazánt (29,8 g, 184,6 millimól) adunk hozzá és a keveréket visszafolyatás és keverés közben 70 óráig forralva világossárga áttetsző oldatot kapunk. Az oldószert vákuumban eltávolítva amorf szilárd anyag marad vissza 43 g; 94% kitermelés, kanamicin A (szilil),0-ként számítva). B) 1 -N-[L-(—)-y-Amino-a-hidroxi-but iril]-kanamicin A p-(Benzil-oxi-karbonil-oxi)-benzoesavat (5,56 g, 20,43 millimól) 50 ml vízmentes acetonitrilben szuszpendálunk 23"-on. Keverés közben N,0-bisz(trimetil-szilii)-acetamidot (8,4 g, 41,37 millimól) adunk hozzá. Az oldatot 30 percig 23°-on tartjuk, majd 3 óra aiatt, élénk keverés közben, 75 ml vízmentes acetonitrilben oldott poli(trimetil-szili!)-kanamicin A-hoz [21,5 gr 17,83 millimól, (szilil)10-vegyü!etként számítva] adjuk hozzá 23J- on. A keveréket 4 óráig keverjük, az oldószert vákuumban (40°) lepároljuk és az olajos maradékot 23°-on 50 ml vízmentes acetonban újra feloldjuk. A fenti oldathoz 5 perc alatt 30 ml acetonban oldott L-(—j-y-benzil-oxi-karbonil-amino-x-hidroxi-vajsav-N-hidroxi-5-norbornen-2,3-dikarboximid-észtert (NAE) adunk. A keveréket 23°-on tartjuk 78 óráig. Az oldatot 100 ml vízzel hígítjuk és a 7,0 pH-t lecsökkentjük 2,5-re (6n HCl). A keveréket 500 ml-es Parr-palackba töltjük 3 g 5/Ó Pd/C katalizátorral együtt (Engelhard) és 2,8 kg/cm2 H2-nyomásnál 2 óráig redukáljuk. A keveréket diatómaföld-szűrőn átszűrjük és a szűrési maradékot 20 ml vízzel átmossuk. Az egyesített szűrlet és mosófolyadék (168 ml) mikrobiológiai próbában Escherichia coli ellen vizsgálva körülbelül 11 400 meg per ml (19% kitermelés) amikacint tartalmaz. 4. példa l-N-[L-(—)-y-Amino-a-hidroxi-butiril]-kanamicin A (amikacin) előállítása poli(trimetil-szilil)-kanamicin A szelektív aciiezésével A) Poli(trimetil-szilil)-kanamicin A 100 ml vízmentes acetonitril és 10 g (206 millimól) kanamicin A szúszpenzióját 25 ml (119 millimól) 1,1,1,3,3,3-hexametil-disziiazánnal 72 óráig visszafolyatás közben forraljuk. Világossárga áttetsző oldatot kapunk, melyet 30—40’-on szárazra párolunk. 21,3 g poli(trimetil-szilil)-kanamicin A-t kapunk világos sárgásbarna por alakjában [85% kitermelés, kanamicin A (szilil)lp-ként számítva]. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
