179665. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-fragmensek és az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
9 179665 10 R,-: Bu : Ac : Wa 4: 1 : 1 arányú elegyében 0,52 13. Dezamino-Met-GIu(OtBu)-D-His—N2H3 Rf: Bu: Ac : Wa 4: 1 : 1 arányú elegyében 0,50 14. Boc-Met-Ala-A!a—N2H3 a) Boc-Ala-Ala-OMe: 20,79 g Boc-Ala—OH-t 150 ml DMF-ben oldunk. Az elegyet lehűtjük —10 ’C-ra és 15,84 ml TAA-t, majd 10,45 ml klórhangyasav-etilésztert adunk hozzá. Az elegyet — 10 ’C-on 10 percig keverjük, ezután 13,9 g H-Ala-OMe.HCl 150 ml DMF-fel készített oldatát és 14,4 ml TAA-t csepegtetünk hozzá. A reakcíóelegyet megfelelő mechanikai eszközzel 15 percig keverjük —10 C-on, 2 óra hosszat 0 'C-on, végül szobahőmérsékleten 8 óráig. Lehűtjük —10 ’C-ra, a TAA.HCl-t leszűrjük és a szűiietet szárazra pároljuk. A maradékot 250 ml etilacetátban oldjuk és egymásután vízzel, 0,05 n sósavval 5%-os kálium-karbonáttal és 30%-os nátriumkloríd oldattal mossuk. Vízmentes nátrium-szulfáttal megszárítjuk, a szűrletet szárazra pároljuk és a maradékot éter és petroléter elegyébő! kristályosítjuk. Termelés: 19,3 g; olvadáspont: 108—110 ~C Rf: To : EtOH 8 : 2 arányú elegyében 0,50 sziliciumdioxidon. b) H-Ala-Ala-OMe.HCl: 18,75 g aj pont szerint előállított Boc-Ala-Aki-OMe-t 150 ml meíilénkloridban oldunk és 45 percig sósavat eresztünk az oldatba és ez alatt az idő alatt jég és víz elegyétel hűtjük. A nem védett termék termelése: 14,3 g. Rf: To : EtOH 8 : 2 arányú elegyében 0,01 szilíciumdioxidon. c) Boc-Met-Aia-Ala-OMe: 15,8 g Boc-Met-hidrazídot 150 ml DMF-ben oldunk és —20 °C-on 28,0 ml THF-ben oldott 4,2 n sósavval és 8,10 ml izoamilnitrittel aktiváljuk. 20 percig aktiváljuk —15 ’C-on és az oldatot 14,5 ml NEM-mel semlegesítjük, majd a b) pont szerint kapott 14,3 g H-Ala-Ala-OMe.HCl-t 75 ml DMF-ben oldva és 1 móíekvivalens NEM-et adunk hozzá. Miután a pH-t NEM hozzáadásával 7,2-re állítottuk, a reakcióelegyet 48 óráig 4 ’C-on hagyjuk állni. A NEM.HCl-t leszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot 300 ml etilacetátban oldjuk és vízzel, 0,05 n sósavval, 5%-os nátriumhidrogénkarbonáttal, majd ismét vízzel mossuk. Vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és a szűrletet szárazra pároljuk és a maradékot etilacetát és petroléter 1 : 1 arányú elegyébő! átkristályosítjuk. Termelés: 16,2 g; olvadáspont: 128—129 ’C. Rf: To : EtOH 8 : 2 arányú elegyében 0,46 szüíciu ndioxidon. d) Boc-Met-Ala-Ala—N2H3: 15,9 g c) pont szerint előállított Boc-Met-Ala-Ala-OMe-t 160 ml metanolban oldunk és 16,0 ml hidrazinhidrátot adunk hozzá. 3,5 óra hosszat keverjük, majd 200 ml száraz étert adunk hozzá. Lehűtjük 0 °C-ra és a kapott terméket leszűrjük. Termelés : 12,6 g. Olvadáspont : 207—208 °C. Rr: Am : iPro : Wa 10:4:5 arányú elegyében 0,41 szilíciumdioxidon. A következő peptideket a 14. pontban leírt módon állítjuk elő: 15. Boc-Ala-Ala-Ala—N2H3 Rf: Am : iPro : Wa 10:4:5 arányú elegyében 0,44 16. Boc-Val-Ala-Ala—N2H3 Rf: Am : iPro : Wa 10 : 4 : 5 arányú elegyében 0,40 17. Boc-Met(-02)-Giy-Ala—N2H3 Rf: Am : iPro : Wa 10:4:5 arányú elegyében 0,37 18. Boc-Met-G!u(OtBu)-Ala—N2H3 a) Z-Glu-OtBu-Ala-OMe: 3,37 g Z.-dlu(OtBu)OH 30 mi acetonitrillel készített oldatát 0 ’C-on hozzáadjuk 1,40 g H-Aki-OMe.HCl 15 mi acetonitrillel készített szuszpenziójához, majd 1 mól ekvivalens TAA-t adunk hozzá, továbbá 2 g DCC1 20 ml acetonitrillel készített oldatát. (— 10 C-on) 30 percig keverjük, majd a reakcióelegyet szobahőmérsékleten még 12 óra hosszat keverjük. 30 ml vizet adunk hozzá, a keletkezett DCHU-t leszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot 100 ml etilacetáítal feloldjuk és ezután vízzel, 5%-os nátrium-hidrogénkarbonátoidattal és 30%-os nátriunv -klorid oldattal és vízzel mossuk. Vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és a szűrletet szárazra pároljuk. Rf: Am : Py : Wa 5:3:2 arányú elegyében=0,89 szilíciumdioxitíon. b) H-Glu-(OtBu)-Ala-OMe. HCI : 2,53 aj pont szerint előállított Z-Glu-(OtBu)-A!a-OMe-t 30 ml metanolban oldunk fel. Hozzáadunk 3,4 mi 2 n sósavat és 700 mg 10%-os palládium-csontszén katalizátort és 2,5 órán át hidrogéngázt vezetünk az oldaton keresztül (amíg a széndioxid fejlődése meg nem szűnik). A katalizátort Hyflon leszűrjük (Mansville Company) és a szűrletet szárazra pároljuk. Termelés: 1,95 g. Rf: Am : Py : Wa 5:3:2 arányú elegyében 0,71 szilíciumdioxidon. ej Boc-Met-G!u(OtBu)-A!a-OMe: ezt a védett peptidet a 14. c) pont szerint állítjuk elő. Termelés;: 90%. Olvadáspont: 103—106 °C. Rf: Am : Py : Wa 5:3:2 arányú elegyében szilíciumdioxidon 0,95. dj Boc-Meí-Glu(OlBu)-A ia—N2H3: a 14. d) pontban leírt módszerrel állítjuk elő. Termelés: 74,9%. Rf: Am : iPro : Wa 10:4:5 arányú elegyében 0,70 szilíciumdioxidon. 19. Boc-Met-Lys-(Boc)-His—N2H3 a) Z-Lys-(Boc)-His-OMe: 22,8 g Z-Lys-(Boc)—OH-t 200 ml DMF-ben oldunk, majd 8,11 g HOBt-t adunk hozzá. Az elegyet lehűtjük —22 ’C-ra és a következő elegyet adjuk hozzá —22 ’C-on: 14,52 g H-His-OMe. 2 HCI 200 ml DMF-fel készített oldata, 2 mólekvivalens TA A és 12,36 g DCCI. 20 percig keverjük —22 ’C-on, 2 óra hosszat 0 ’C-on és 16 óráig szobahőmérsékleten. A DCHU-t és a TAA—HCl-t leszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk és vízzel 5%-os nátrium-hidrogénkarbonát oldattal és végül ismét vízzel mossuk. Vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, az oldatot kis tömegűvé koncentráljuk. Étert adunk hozzá és a tennék kikristályosodik. Termelés: 19,2 g; olvadáspont: 138— 140’C. Rf: To : EtOH 8 : 2 arányú elegyében 0,35 szilíciumdioxidon. b) H-Lys-(Boc)-His-OMe. HCI : 19 g Z-Lys(Boc)-His-OMe-t 210 ml DMF-ben és 2 móíekvivalens HC1- -DMF elegyben oldunk. 10%-os palládium-csontszén katalizátor hozzáadása után 3 óráig hidrogéngázt vezetünk be. A katalizátort leszűrjük és a szűrletet bepárlással mintegy 100 ml-re koncentráljuk. Rf: Am : Py : Wa 5:3:2 arányú elegyében 0,38 szilíciumdioxidon. c) Boc-Met-Lys(Boc)-His-OMe: a módszer azonos a 14. c) pontban leirt módszerrel. Rf: Am : Py : Wa 5:3:2 arányú elegyében 0,24 szilíciumdioxidon. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
