179663. lajstromszámú szabadalom • Eljárás D-alfa-aminosavak előállítására
9 179663 10 5. példa D- vagy L-5-(p-hidroxifeni!)-hidantoinbóI a 4. példában ismertetett módon Achromobacter liquefaciens AJ 11 198, Alcaligenes aquamarinus AJ 11 199, Moraxella nonliquefaciens AJ 11 221, Paracoccus denitrificans AJ 11 222 és Arthrobacter fragil us AJ 11 223 törzzsel a 4. táblázatban megadott mennyiségű D-5-(p-hidroxifenil)-hidantoint állítunk elő. 4. táblázat Az átalakításhoz használt mikroorganizmus A kapott ksirtályos termék mennyisége (g) D'5-(p-OH-fenil) hidantoin L-(p-OH-fenil) hidantoin AJ 11 198 2,96 3,16 AJ 11 199 3,02 3,06 AJ 11 221 4,09 4,06 AJ 11 222 2,82 2,86 AJ 11 223 3,18 3,10 6. példa Egy 500 ml-es edénybe betöltjük egy deciliterenként 1.0 g glükózt, 0,5 g ammóniumszulfátot, 0,1 g káiium-dihidrogénfoszfátot, 0,3 g dikálium-hidrogénfoszfátot, 0,05 g magnéziumszulfát heptahidrátot, 1 mg ferroszulfát heptahidrátot, 1 mg mangánszulfát tetrahidrátot, 1.0 g élesztőkivonatot és 0,2 g DL-5-metilmerkaptoetil-hidantoint tartalmazó tápoldat 50 ml-es frakcióját. A tápoldatot 120 °C-on sterilizáljuk 15 percig. A tápközeghez hozzáadunk 5 g/d! előzetesen sterilizált kalciumkarbonátot, azután beoltjuk egy oltókaccsal kivett Pseudomonas caryophylli AJ 11 150 tenyészettel, amelyet ferde bouillon agaron készítettünk 30 °C-on 24 órán át folytatott tenyésztéssel. A tápközegre oltott mikroorganizmust rázás közben 30 °C-on tenyésztjük 16 órán át, azután a tenyészethez 1 g/dl DL-5-(p-hidroxifenil)-hidantoint adunk. A tenyésztést további 24 órán át folytatjuk. A kapott tápközeg 5,83 mg/ml D-p-hidroxifenilglicint tartalmaz. 7. példa Pseudomonas caryophylli AJ 11150 törzs sejtjeit, amelyeket az 1. példa szerinti módon tenyésztettünk, 0,1 mólos foszfátpufferban szuszpendáljuk 5 g/dl koncentrációban (a végső térfogat 10 ml). A közeget ezután 5 percig sugározzuk be 20 KC ultrahanggal. Az ultrahangos besugárzás után a szuszpenziót centrifugáljuk, és a felső fázishoz 1 g/dl koncentrációban DL-5-(p-hidroxifenil)-hidantoint adunk. Az oldat pH-ját 8-ra állítjuk be. A reakcióelegyet 30 °C-on tartjuk 24 órán át. Az így kapott reakcióelegyben 7,20 mg/ml D-p-hidroxifenilglicint találtunk. 8 8. példa A 2. példa szerinti módon tenyésztett Achromobacter liquefaciens AJ 11 198, illetve Alcaligenes aquamarinus AJ 11 119 törzs felhasználásával megismételjük a 7. példában leírt eljárást. Az AJ II 198 jelű törzzsel 0,64 g/dl aminosavat tartalmazó reakcióelegyet, az AJ 11 199 törzzsel pedig 0,68 g/d! aminosavat tartalmazó reakcióelegyet állítunk elő. 9. példa Megismételjük a 7. példa szerinti eljárást, azzal az eltéréssel, hogy ezúttal a 3. példa szerinti módon tenyésztett Moraxella nonliquefaciens AJ 11 221, Paracoccus denitrificans AJ 11 222 és Arthrobacter fragilus AJ 11 223 törzseket használunk. A kapott reakcióelegyben az AJ 11 221 jelű törzs használata esetén 0,82 g/dl, az AJ 11 222 jelű törzs használata esetén 0,51 g/dl, az AJ 11 223 jelű törzs használata esetén pedig 0,67 g/dl D-p-hidroxifeniiglicint találtunk. 10. példa Pseudomonas caryophylli AJ 11 150 törzs 1. példa szerinti módon tenyésztett sejtjeiből I g-ot felszuszpendálunk 4 ml ionmentesített vízben. A szuszpenziót lehűtjük és hozzáadunk 750 mg akrilamidot és 45 mg metilén-bisz-akrilamidot. Az oxigént nitrogéngáz átvezetésével kiűzzük a szuszpenzióból, azután a szuszpenzióhoz 3,5 mg ammóniumperszulfátot és 8 mikroliter N,N'-dimetilamino-propionitrilt adunk. Ezután a reakcióelegyet 1 órán át hűtjük. Az így kapott gélt átvisszük egy 50 mesh lyukméretű drótszöveten, majd 2 g gélt hozzáadunk 5 ml 0,1 mólos foszfátpufferhez (pH=8,0), amely 1 g/dl DL-5-(p-hidroxifenil)-hidantoint tartalmaz. A reakcióelegyet 24 órán át 30 °C-on tartjuk. Ekkor 3,24 mg/ml D-p-hidroxifenilglicint találunk a reakcióelegyben. A fentiekhez hasonló módon megismételjük az eljárást Achromobacter liquefaciens AJ 11198, Alcaligenes aquamarinus AJ 11199, Moraxella nonliquefaciens AJ 11 221, Paracoccus denitrificans AJ 11 222 és Arthrobacter fragilus AJ 11 223 törzsekkel, amikoris rendre 0,34 g/dl, 0,35 g/dl, 0,50 g/dl, 0,28 g/dl, illetve 0,38 g/dl D-p-hidroxifenilglicint tartalmazó reakcióelegyet kapunk. 11. példa Egy deciliterenként 2,0 g glükózt, 0,5 g ammóniumszulfátot, 0,1 g kálium-dihidrogénfoszfátot, 0,1 g dikálium-hidrogénfoszfátot, 0,05 g magnéziumszulfát heptahidrátot, 1 mg ferroszulfát heptahidrátot, 1 mg mangánszulfát tetrahidrátot, 1,0 g élesztőkivonatot és 4,0 g kalciumkarbonátot tartalmazó vizes tápközeg pH-ját 7,0-ra állítjuk be, és a tápközeg 50 ml-es frakcióit 500 ml-es edényekbe helyezzük. A tápközeget 120 °C-on sterilizáljuk 15 percig. Ferde bouillon agaron 30 °C-on 24 órán át tenyésztett Pseudomonas caryophylli AJ 11 150 törzset ráoltunk az előbbi tápközegre, és a tenyésztést 30 °C-on folytatjuk. 16 óra múlva az 5. táblázatban felsorolt előzetesen hősterilizált 5-szubsztituált hidantoinokat adjuk a tápközeghez 0,2 g/dl mennyiségben, azután a tenyésztést 6 órán át folytatjuk tovább. A tápközegben ekkor kapott sejteket kicentrifugáljuk és fiziológiás sóoldattal mossuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
