179655. lajstromszámú szabadalom • Eljárás interferon termelés fokozására
7 179655 8 I. táblázat A sejtek előkezelésénél alkalmazott nátrium-butirát koncentráció (mmól) koncentráció (log io referencia interferonegység/ml) Interferon-hozam mega-egység) liter 0 4,09 12 0,1 4,05 íi 0,2 4.26 18 0,5 4,62 42 1,0 4,92 83 2,0 4,96 91 5,0 4,70 50 3. példa A 2. példa szerinti módszert alkalmazzuk interferon előállítására azzal az eltéréssel, hogy nátrium-butirát helyett nátríum-acetátot alkalmazunk a következő koncentrációs értékek mellett: 0, 0,2, 1,0, 5,0 mmól. A kapott eredmények a II. táblázatban láthatók. II. táblázat A sejtek előkezelésénél alkalmazott nátrium-acetát koncentráció (mmól) Interferon koncentráció (log io referencia interferonegység/ml) Interferon-hozam mega-egység/liter 0 3,55 3,5 0,2 3,52 3,3 1,0 3,59 3,9 5,0 3,98 9,6 4. példa A 2. példa szerinti módszert alkalmazzuk interferon termelésre, azzal a különbséggel, hogy nátrium-butirát helyett a következő koncentráció értékekben nátriumpropionátot alkalmazunk: 0, 0,5, 1,0, 2,0, 5,0 és 10,0 mmól. A kapott eredmények a III. táblázatban láthatók. III. táblázat A sejtek előkézelésénél alkalmazott nátrium-propionát koncentráció (mmól) Interferon koncentráció (logi o referencia interferonegység/ml) Interferon-hozam mega-egység/liter 0 3,69 5 0,5 3,71 5 1,0 4,20 16 2,0 4,49 31 5,0 4,05 11 10,0 4,15 14 5. példa A 2. példában megadott módszert alkalmazzuk interferon termelésre azzal a különbséggel, hogy nátrium-butirát helyett nátrium-pentanoátot alkalmazunk a következő koncentrációértékek mellett: 0, 0,2, 0,5, 1,0, 2,0 és 5,0 mmól. A kapott eredmények a IV. táblázatban láthatók. IV. táblázat A sejtek előkezlésénél alkalmazott nátrium-pentanoát koncentráció (mmól) Interferon koncentráció (log10 referencia interferonegység/ml) Interferon-hozam megaegység/Iiter 0 3,81 6 0,2 3,94 9 0,5 4,26 18 1,0 4,59 39 2,0 4,85 71 5,0 4,37 23 6. példa A 2. példa szerinti módszert alkalmazzuk interferon termelésre azzal a különbséggel, hogy nátrium-butirát helyett a következő koncentrációban nátrium-hexanoátot alkalmazunk: 0, 0,2, 0,5, 1,0 és 2,0 mmól. A kapott eredmények az V. táblázatban láthatók. V. táblázat A sejtek előkezelésénél alkalmazott nátrium-hexanoát koncentráció (mmól) Interferon koncentráció (log io referencia interferonegység/ml) Interferon-hozam mega-egység/liter 0 3,20 2 0,2 3,69 5 0,5 3,63 4 1,0 3,80 6 2,0 3,99 10 7. példa Nátrium-butirátos kezelés következtében kialakult interferon hozam növekedésének visszaesése Namalva/WRL sejteknél 50 ml-es mennyiségű, 1,0 xlO6 sejt/ml koncentrációjú Namalva/WRL sejtszuszpenziót 7 térfogat% borjúvérsavót tartalmazó friss RPMI 1640 közegben szuszpendáljuk és a szuszpenziót 75 cm2 hasznos területű 5 db szövettenyésztésre alkalmas műanyag lombikba helyezzük. Foszfátpufferes sóoldatban oldott nátrium-butirátot adunk 4 mintához olyan mennyiségben, hogy 1,0 mmól végkoncentráció alakuljon ki. A lombikokat 36 °C-on 48 óra hosszat inkubáljuk. A nátrium-butiráttal nem kezelt és az 1 mmól koncentrációban nátrium-butiráttal kezelt lombikokban levő sejteket a közegtől lOOOxg gyorsulás mellett 5 percig centrifugálással ülepítjük, majd a sejtmasszát 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
