179594. lajstromszámú szabadalom • Eljárás heparin előállítására
5 179594 6 az 1. példában leírt módon tisztítjuk. 10,65 g nátrium-heparinátot kapunk, melynek aktivitása 262 USP-egység/mg. 3. példa 3 liter sóslé kloridion-koncentrációját 12 liter vízzel körülbelül 0,85 mólra hígítjuk. Ezután 50 g kovaföldet és 6 g bezetonium-klorid (=hiamin 1622,10 Rohm and Haas) 100 ml vízzel készült oldatát adjuk hozzá. Néhány óra múlva a felülúszót dekantáljuk és a maradékot leszívatjuk. Vizes mosás után a még nedves csapadékot az 1 228 241 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli szabadalmi leírás eljárása szerint 15 3 x 200 ml 2 mólos konyhasóoldattal extraháljuk. Az egyesített kivonatokat 2 térfogatrész metanollal kicsapjuk. Az izolált és szárított csapadék súlya 465 mg, aktivitása 155 USP-egység/mg. 4. példa 30 liter sóslé kloridion-koncentrációját 120 liter vízzel körülbelül 0,85 mólra állítjuk be (lásd az 25 1 156 938 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli szabadalmi leírást), majd ecetsavval (körülbelül 50 ml pH 3,2-ig megsavanyítjuk. Néhány óra alatt csapadék válik ki, melyet a tiszta felülúszó dekantálása után lecentrifugálunk. Szárítás után 111 g nyers heparint 30 kapunk, melynek aktivitása 6,5 USP-egység/mg. E termék 65,5 g-ját (425 000 USP-egység) az 1. példa szerint tisztítjuk. Az ioncserélővel végzett első tisztítási művelet után 196 g nátrium-heparinátot kapunk, melynek aktivitása 198 USP-egység/mg. 35 A fentiek szerint előállított 15 g nátrium-heparinátot (aktivitása körülbelül 200 USP-egység pro mg) 200 ml 2 n kalcium-klorid-oldatban oldunk. Az oldatot nuccs-szűrőn leszívatjuk és a maradékot először 30 ml 2 n kalcium-klorid-oldattal, majd körülbelül 40 250 ml sómentesített vízzel mossuk. Az egyesített oldatok kloridion-koncentrációját sómentesített vízzel 0,9 mólra állítjuk be, majd a fentiek szerint 1 liter Lewatit CA 9249 ioncserélővel elkeverjük. Az elúciót és az utánmosást konyhasóoldat helyett 2 n CaCl2 -oldattal hajtjuk végre. Az egyesített eluáló- és mosóoldatokat a fentiek szerint feldolgozzuk. A csapadék mosása és szárítása után 10,7 g kalcium-heparinátot kapunk, melynek aktivitása 260 USP-egység/mg. 5. példa 10 liter sóslé kloridion-koncentrációját 40 liter vízzel körülbelül 0,85 mólra állítjuk be. Az oldatot 26 mm átmérőjű és 380 mm hosszú ioncserélő oszlopon átszűrjük (körülbelül 3 liter per óra). Közepesen bázikus, makropórusos, Cl “-formájú anioncserélő gyantát alkalmazunk (Lewatit CA 9249). Más anioncserélők is használhatók, mint például az 1 253 868 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli szabadalmi leírásban Dowex-l-X-1. Ezután a gyantát az oszlopból eltávolítjuk, 2 x 500 ml 0,9 mólos konyhasóoldattal mossuk és 400 ml 2 mólos konyhasóoldattal 5 óráig 40 °C-on keverés közben eluáljuk. Az oldatot 1,5 térfogatrész metanollal kicsapjuk. Az izolált és szárított csapadék súlya 1,2 g, aktivitása 149 USP-egység pro mg. Szabadalmi igénypont: Eljárás tiszta heparin, állati szövetek sóoldataiból '■'aló izolálására önmagukban ismert módszerekkel, azzal jellemezve, hogy kiindulóanyagként bélnyálkától mentesített állati bél nátriumklorid-oldattal történő kezelésével előállított sós bélpáclevet használunk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 83.4154 - Zrínyi Nyomda, Budapest
