179583. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hatóanyagként 3-szubsztituált- 2-(aminokarbonil)- oxirankarbonsav-észtert tartalmazó lipogenézis inhibitor készítmények előállítására
7 179583 8 pil-alkohol és 1 ml nátrium-karbonát oldat elegyéhez 60 °C-on. Az clegyet ezután 70 °C-on 1 óráig melegítjük és az oldószert csökkentett nyomáson le pároljuk. A maradékhoz 100 ml vizet adunk és az elegyet metilénkloriddal extraháljuk. Az extraktumot (Celiten) szárítjuk és az oldószert csökkentett nyomáson lepároljuk. A maradékot meleg pentánnal eldörzsöljük és izopropil-alkoholból átkristályosítjuk, vákuum kemencében szárítjuk és így a cím szerinti terméket kapjuk, op.: 118-119 °C. 8. példa 2-(Aminokarbonil)-3-feniloxirán-metil-karboxilát 100 ml 30%-os hidrogén-peroxidot adunk 20 perc leforgása alatt 67 g l-fenil-2-ciano- 2-(etoxikarbonil)-1,2-epoxietán (2. irodalom), 400 ml metanol, 20 g hárombázisú nátrium-foszfát (hidrát) és a 8 g korona (6) éter kevert elegyéhez 25 °C-on. A hőmérsékletet hagyjuk az adagolás alatt 50 °C-ra emelkedni. Az elegyet ezután lehűtjük 45 °C-ra és 10 perc leforgása alatt 150 ml hidrogénperoxidot adunk hozzá. A hőmérséklet 48 °C-ra emelkedik. A hőmérsékletet ezen a hőfokon tartjuk 1 óráig, majd 60 °C-ra emeljük és 2 óráig ezen a hőfokon tartjuk. Az illékony részeket csökkentett nyomáson lepároljuk. A maradékot kloroformból átkristályosítjuk és így a cím szerinti terméket kapjuk, op: 175-177 °C. 9—11. példa Az 5-8. példák szerinti eljárással az alábbi I képletti vegyületeket állítottuk elő a megfelelő benzaldehidből. A vegyületek esetében R1 és R2 jelentése híd rogénatom, R3 jelentése etilcsoport, és R R° csoporttal szubsztituált fenilcsoport. Példák R° Op°C 9 4-kiór-160-161 10 4-acetil 139-140 11 3,4-diklór-171-172 12. példa A lipogenézís gátlás kimutatására szolgáló teszt A 3-szubsztituált-2-(aminokarbonil)-oxiránkarbonsav-észterek hatékonyságát úgy vizsgáljuk, hogy radioaktív glükózt és a teszt vegyületet tartalmazó folyadékba merítünk sertészsír szövetet egy bizonyos időtartamig, majd a kezelt szövetből a lipidet izoláljuk és szcintillációs számlálón meghatározzuk a radioaktív szén felvételt. A kísérleteket azért végezzük sertészsír szöveten, mert sertésben az adipóz szöveten megy végbe elsődlegesen a lipogenézís. A következőkben részletesebben leírjuk a kísérlet lefolytatásának körülményeit. 4 150 mg sertészsír szövet szeleteket 27 °C-on inkubálunk 2 óráig oly módon, hogy 60 mikrontól glükózt, 0,5 mikro-Curie glükóz-U14C-t, 300 mikroegység inzulint és 5% dimetilszulfoxidot tartalmazó 0,5 N kalcium-ion koncentrációjú 3 ml Krebs-Ringer hidrogénkarbonát oldatban rázzuk. A teszt vegyületeket oldat vagy szuszpenzió formájában dimetilszulfoxidban adagoljuk és az inkubációs elegyben 100 mikrogram/ml koncentrációban vannak jelen. Az inkubációt úgy fejezzük be, hogy 0,25 ml 1 N kénsavat adunk hozzá és a kapott elegyet 25 ml kloroform és metanol 2 : 1 arányú elegyével extraháljuk. Az extraktumokat Folch és társai szerint mossuk (J. Biol. Chem., 226,497-509 (1959)], levegőn szárítjuk és 15 ml számláló folyadékot tartalmazó folyadék szcintillációs számlálóval számláljuk (a számláló folyadék 2 rész 0,4 vegyes százalékos New England Nuclear Omnifluort tartalmazó toluolt és 1 rész Triton X- 100-at tartalmaz 2 : 1 arányban). A kísérleteket háromszor ismételtük meg és olyan kontroll tesztet is végeztünk, amelyben minden komponens, arány és feltétel azonos volt, kivéve, hogy nem tartalmazott teszt vegyületet. A kapott adatokból minden esetben kiszámítottuk a teszt vegyület által okozott százalékos lipid szintézis gátló hatást. A tesztekben kapott eredményeket az I. táblázat tartalmazza, olyan formában, hogy összehasonlítjuk a teszt vegyületeket tartalmazó elegyek százalékos lipogenézis gátló hatását a teszt vegyületeket nem tartalmazó kontroll elegyekkel elért lipogenézís gátló hatással. I. táblázat Példa szám Százalékos gátló hatás O) 88 (2) 83 (3) 85 (4) 18 (5) 27 (6) 75 (7) 48 (8) 47 (9) 65 (10) 37 (H) 87 Szabadalmi igénypontok; 1. Eljárás melegvérűek lipogenézisét gátló, hatóanyagként I általános képletű 3-szubsztituált-2-aminokarbonil-oxiránkarbonsav-észtert - ahol R jelentése 4-8 szénatomos alkilcsoport, vagy adott esetben egy vagy két klóratommal vagy 1—4 szénatomos alkilcsoporttal szubsztituált fenilcsoport, vagy 3-6 szénatomos cikloalkilcsoport és R1 és R2 egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport, és R3 jelentése 1—4 szénatomos alkilcsoport, -tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására 5 10 15 20 23 30 35 40 45 50 55 60 65
