179570. lajstromszámú szabadalom • Molekula-szelektív érzékelő és eljárás annak előállítására
9 179570 10 A 2. példa szerint más molekula-szelektív érzékelők is megvalósíthatók. A III. táblázatban összefoglalva néhány további példát ismertetünk. A táblázatban az első oszlopban azt a molekula-fajtát jelöltük, amelyre az érzékelő szelektív, a második oszlopban az immobilizált enzimfajtát, a harmadikban az alkalmazandó szelektív jelzőelektródot szerepeltettük. A meghatározandó anyag III. táblázat Az immobilizált enzim A jelzőelektród L-dioxi-L-aminosav Ammóniumion-fenilalanin oxidáz-szelektív E.C.1.4.3.2. Dfenilalanin L-aminosav Ammóniumionoxidáz-szelektív L-aminosavak E.C.1.4.3.2. L-aminosav Ammóniumionoxidáz-szelektív D-szerin E.C.1.4.3.2. D-szerin Ammóniumiondehidratáz-szelektív Dhomoszerin E.C.4.2.1.14. Homoszerin Ammóniumiondehidratáz-szelektív Dtreonin E.C.4.2.1.15. Treonin Ammóniumiondehidratáz-szelektív Dhisztidin E.C.4.2.1.16. Hisztidináz Ammóniumion-E.C.4.3.1.3.-szelektív nitrit Nitrit reduktáz Ammóniumion-E.C.l.6.6.4.-szelektív 3. példa A találmány szerinti arginin-szelektív érzékelő példakénti kiviteli alakjának felépítése lényegében azonos a 2. példában leírt karbamid-szelektív érzékelő felépítésével. Az eltérés annyi, hogy az 1 burkoló-test végén két egymást fedő természetes eredetű 7 membrán van 8 gyűrűvel rögzítve, amelyek közül a 4 jelzőelektród felé eső membrán felületén ureáz enzim, a másik, perforált membrán felületén argináz enzim van immobilizált állapotban megkötve. Az arginin-szelektív érzékelő így két reakció réteggel van kiképezve. A találmány szerinti arginin-szelektív érzékelő előállítása a következőképpen történik. Először kialakítjuk a 2. példában leírt módon a karbamid-szelektív érzékelőt. Ezután az ureáz enzimet tartalmazó természetes membránon még egy juh-bélből készült természetes alapú perforált membránt helyezünk el, amelynek felületén alakítjuk ki az argináz enzimet (E.C.3.5.3.1.) tartalmazó reakció réteget. Utóbbi előállítása az 1. példában leírtakkal azonos módon történik, azzal a különbséggel, hogy a pufferoldatban 10 mg albumint is szuszpendálunk. Az arginin-szelektív érzékelő megvalósítható úgy is, hogy csak egy olyan természetes eredetű 7 membránt használunk fel az érzékelő kialakítására, amelynek felületén statisztikusan homogén eloszlásban két fajta enzim, az argináz és az ureáz van immobilizálva. Ennél a változatnál az érzékelő további felépítése és előállítása értelemszerűen az előzőekben ismertetett táltozatnál leírtakkal azonos. Az érzékelő működése kétlépéses reakción alapul: argináz l.-arginin + H2 0------------* E.C.3.5.3.1. Uornitin+ karbamid ureáz karbamid + H2 0------------*• E.C.3.5.1.5. szén-dioxid + ammónia A mérendő arginin-koncentrádó meghatározása ismert módon kalibrációs görbe felhasználásával vagy tddíciós módszer alkalmazásával történik. A 3. példához hasonlóan két reakció réteggel vagy a két enzimfajtát statisztikusan homogén eloszlásban tartalmazó reakció réteggel készíthető találmány szer'nti molekula-szelektív érzékelőkről a IV. táblázat ad áttekintést. A táblázat első oszlopában a molekula-í zelektív érzékelővel meghatározható molekula áll, második oszlopban a külső természetes anyagú membránon immobilizált enzim katalizátor található. A harmadik oszlopot a belső — jelzőelektródhoz közelebb elhelyezett — membránon immobilizált enzim katalizátorok alkotják. A negyedik oszlopba a jelzőelektródokat soroltuk. 4 példa A 4. példában a találmány szerinti két funkciós molekula-szelektív érzékelő példakénti kiviteli alakját ér, előállítását mutatjuk be. Az 1 burkoló-testben levő puffer-sajátságú, kloridion-tartalmú 2 elektrolit oldatban két 3 hordozó-testbe épített, platina 4 jelzőelektród van elhelyezve. 4 jelzőelektródok felületével 1 burkoló-test nyílására rögzített gázátjárható polipropilén 6 hártya van érintkezésben. 6 hártya felületét bőr, mint természetes eredetű 7 membrán fedi. A természetes eredetű 7 membrán egyik 4 jelzőelektróddal érintkező felületi részletén, vagy ennek megfelelő, a membrán ellentétes oldalán vett felületi részletén D-aminosav öxidáz, a núsik 4 jelzőelektróddal érintkező felületi részletén, vagy ennek megfelelő, a membrán ellentétes oldalán vett felületi részletén L-aminosav oxidáz enzim van immobilizált állapotban megkötve. A két funkciós molekula-szelektív érzékelő felépítése a további részleteket tekintve értelemszerűen olyan, mint az 1. példában leírt érzékelőé. Az aminosav oxidázt tartalmazó reakció rétegek előállítása a következőképpen történik. A gázátjárhitó polipropilén hártyára kifeszítjük a nedves bőr membránt. 30 percig szobahőmérsékleten száradni hagyjuk. Ezután a membrán egyik felületi részletén 10 pl olyan pH = 8,3 értékű foszfát pufferoldatot terítünk szét, amelynek 0,1 ml-e 5 mg D-aminosav oxidáz enzimet (E.C.l .4.3.3. Sygma, kristályos) tartalmaz S/uszpendálva, majd 10 pl 25%-os glutáraldehidet adunk hozzá. Ezt követően a membrán másik felületi 5 10 15 20 25 Ü 35 40 45 50 55 60 65 5
