179542. lajstromszámú szabadalom • Specifikus kötésen alapuló kimutatási módszer és kompozíció antigének és haptének kimutatására
15 179542 16 C. táblázat A termék .NADPX\ reaktáns \ / enzim A reaktáns ''^NADPHXX^ B termék enzim Reakció A reaktáns vagy B termék Enzim B reaktáns vagy A tennék 1 6-foszfoglükonát glükóz-6-foszfát-•dehidrogenáz glükóz-6-foszfát 2 oxidált glutation glutation-reduktáz redukált glutatior 3 p-benzokinon kinon-reduktáz hidrokinon 4 nitrát nitrát-reduktáz nitrit 5 a-ketoglutarát + nh3 glutaminsav-dehidrogenáz glutamát xnikotinamid-adenin-dinukleotid-foszfát ^redukált NADP miokináz AMP + ATP_______»2 ADPX piruvát-kináz ADP + PEPXX—------------> ATP 4- piruvát XADP = adenozindifoszfát XXPEP = foszfoenolpiroszőlősav Megjegyezzük továbbá, hogy a B. és C. tábláza-25 tokban ismertetett ciklusos reakciórendszerek tulajdonképpen úgy alakulnak ki, hogy a táblázatokban említett valamelyik reakciót bármelyik másik reakcióval kombináljuk. Így például a B. táblázatban említett 1. reakció a 2-8. reakciók bármelyikével páro-30 sítható, előnyösen alkalmazható ciklusos reakciórendszer képzésére. így tehát a B. és C. táblázatok 56, illetve 20 lehetséges reakciórendszert jelképeznek, amely reakciórendszerek mindegyike felhasználható a találmány szerinti eljárásban. 35 A B. és C. táblázatok által jelképezett ciklusos reakciórendszereken túlmenően megjegyezzük, hogy az ott ismertetett reakciók valamelyike kiválthatja egy spektrofotometriás indikátor, előnyösen egy kolorimetriás indikátor enzimatikus vagy nem-enzima- 40 tikus konverzióját. Egy ilyen rendszerben a reakcióban vagy reakcióba ciklusosán visszatérő anyag ciklus-sebességében bekövetkező bármiféle vauozást az indikátor spektrofotometriás tulajdonságainak változása követi. Ha az előnyös kolorimetriás indikátorokat 45 használjuk, akkor egy ilyen változás eredménye színváltozásban jelentkezik. Egy indikátor konvertálását magába foglaló ciklusos reakciórendszerre példaként megnevezhetjük azt a rendszert, amely úgy képződik, ha a B. táblázatban felsorolt, B reaktánsból 50 kiinduló és B terméket eredményező reakciók valamelyikét egy olyan reakcióval kombináljuk, amely egy oxidációs-redukciós indikátor (röviden: redox indikátor) és egy elektrontranszfert biztosító anyag között megy végbe. Az utóbb említett anyagként például 55 N-metil-dibenzopirazin-metilszulfátsót használhatunk. Hasznosítható indikátorok közé tartozik például a 2-(4-jód-fenil)-3-(4-nitro-fenil)-5-fenil-tetrazólium-klorid, 3-(4,5-dimetil-2-tiazolil)-2,5- difenil-tetrazólium-bromid és diklór-fenol-indofenol indikátorok oxidált 60 formája. Követő reakciószerként használhatunk továbbá úgynevezett exponenciális ciklusos reakciórendszereket. Egy exponenciális ciklusos reakciórendszer például az alábbi reakciórendszer: 65 Egy ilyen ciklusos reakció autokatalitikus olyan értelemben, hogy minden egyes ciklus során a reakcióba ciklusosán visszatérő anyag mennyisége megkétszereződik. A keringtetési sebesség ezért az idővel exponenciálisan nő és így nagymértékű érzékenységet biztosít. Az ilyen ciklusos reakciók közelebbi részletei a J. Biol. Chem., 247, 3558-3570 (1972) irodalmi helyről ismerhetők meg. A találmány szerinti eljárással bármely olyan ligandum kimutatható, illetve meghatározható, amelynek van specifikus kötést létesíteni képes partnere. így a ligandum rendszerint egy pepiid, fehérje, szénhidrát, glükoprotein, szteroid vagy más olyan szerves molekula, amelynek van specifikus kötésre képes partnere biológiai rendszerekben vagy pedig előállítható ilyen partner. A ligandum közelebbről lehet egy antigén vagy ennek antitestje, egy haptén vagy ennek antitestje, továbbá egy hormon, vitamin, metabolit vagy farmakológiailag hatásos anyag, valamint ezek receptorai és az ezeket megkötni képes anyagok. A találmány szerinti eljárással kimutatható ligandumokra példaként közelebbről megemlíthetjük a hormonok közül az inzulint, chorion-gonadotropint, tiroxint, tireoidokat és ösztriolt, az antigének és a haptének közül a ferritint, bradikinnint, prosztaglandinokat és tumorspecifikus antigéneket, a vitaminok közül a biotint, a B12 vitamint, folsavat, E vitamint és az aszkorbinsavat, a metabolitok közül a 3’,5’-adenozinmonofoszfátot és 3’,5’-guanozin-monofoszfátot, a farmakológiailag hatásos vegyületek közül a dilantint, digoxint, morfint, digitoxint és a barbiturátokat, az antitestek közül az úgynevezett mikroszomális antitestet és a hepatitisz-antitestet és az allergéneket, vala8
