179464. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-40 104 jelű antibiotikum előállítására
179464 18 214 liter az 1. példában megadottak szerint előállí;ott teljes tenyészlevet szűrési segédanyag jelenléiében szűrünk, amikor 119 liter szürletet kapunk. A szűrési maradékként kapott micéliumot vízzel mossuk, majd az így kapott 80 liter szűrletet egyesítjük az ;redeti szűrlettel. A 199 liter térfogatú egyesített szűrletet a szűrlet pH-ján 80—80 liter etilacetáttal extraháljuk. Egyesítjük az etilacetátos extraktumokat, és csökkentett nyomáson körülbelül 2 liter térfogatra töményítjük. Az aktív antibiotikum-komplex kicsapására körülbelül 20 liter hexánt adunk az oldathoz. Szűréssel elkülönítjük a kivált antibiotikum-komplexet, majd körülbelül 300 ml etilacetátban újra feloldjuk, és hexánnal újra kicsapjuk. Hexánnal mossuk az elkülönített csapadékot, majd szárítjuk, ami után A, B és C komponenseket tartalmazó 27,3 g A—40 104 antibiotikum-komplexet kapunk. 5 g így előállított komplexet 40 ml kloroformban oldunk. Szűrjük a kloroformos oldatot, a szűrletet nyitott 5,6x28 cm átmérőjű üvegoszlopban szilikagélen (Woelm) kromatografáljuk. Az eredetileg kloroformmal töltött oszlopot percenként 2 ml sebességgel kloroformmal eluáljuk, miközben 20 ml térfogatú frakciókat különítünk el. A 7. frakció után kloroform és metanol 95 : 5 arányú elegyével folytatjuk az eluálást, a 28. frakció elkülönítése után az eluálást kloroform és metanol 9 : 1 arányú elegy ével folytatjuk. A 72—120. frakciókat egyesítjük, csökkentett nyomáson desztilláljuk, amikor 4 g súlyú száraz, por alakú terméket kapunk. Űjabb tenyészlevet dolgozunk fel a fentiekben megadottak szerint, amikor 6 g száraz, por alakú termékhez jutunk. Egyesítjük a két terméket, a 10 g összsúlyú mintát 100 ml kloroformhoz adjuk. A kloroformban nem oldódó anyagot szűréssel elkülönítjük, ily módon 1,6 g A-40 104 A komponenst kapunk. A szűrletet nyitott üvegoszlopon 5,8x48 cm) szilikagélen (Woelm) kromatografáljuk. A kloroformmal készült oszlopot kloroformmal mossuk, az eluálást kloroform és metanol 97,5 : 2,5 arányú elegyével végezzük. Az eluálás sebessége 4 ml/perc, az elkülönített frakciók térfogata 20 ml. A 156-190. frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A desztillációs maradékot kevés kloroformban oldjuk, az oldathoz hexánt adunk a termék ki csapására. Szűréssel elkülönítjük a csapadékot, amikor szárítást követően 99 mg A—40 104 B komponenst kapunk. 17 6. példa A 19,20-dihidro-A-40 104 A komponens előállítása 10,15 g (0,0199 M) A-40 104 A komponenst 188 ml tetrahidrofuránban oldunk. Az oldathoz 2,5 g 5% palládiumot tartalmazó szénporos katalizátort adunk. 4 órán át szobahőmérsékleten hidrogénezzük a reakcióelegyet, ezt követően celite rétegen át üvegszűrőn szüljük. Csökkentett nyomáson desztilláljuk a szűrletet. A száraz desztillációs maradékot etilacetát és metanol 2 : 1 arányú elegyéből kikristályosítva 7,0447 g (0,01375 M) 19,20-dihiro-A-40 104 A komponenst kapunk, kitermelés: 69%. 7. példa A 19,20-dihidro-A-40 104 B komponens előállítása A 6. példában megadottak szerint eljárva az A—40 104 B komponenst hidrogénezzük, ami után 19,20-dihidro-A-40 104 B-t kapunk. 8. példa A tetraacetil-A40 104 A komponens előállítása 2 g A 40 104 A komponenst 5 ml vízmentes piridinben oldunk. Az oldathoz 5 ml ecetsavanhidridet adunk. 120 órán át szobahőmérsékleten hagyjuk állni az így kapott átlátszó oldatot. Ezután 20 ml metanolhoz öntjük a reakcióelegyet, majd csökkentett nyomáson addig desztilláljuk, míg a piridin és az ecetsav nyomai is eltávoznak. Desztillációs maradékként 2,1 g A—40 104 A-tetraacetil-származékot kapunk. Az előállított vegyület forgatása: [a]pS : -22,2° (konc.: 1,0, etanolban). Az előállított vegyület tapasztalati képlete C35Hso013, molekulasúlya tömegspektrometriás mérés szerint 678,325. Elemanalízis képletre C35HSoOi 3 számított: C = 62,00%, H = 7,40%, O = 30,60%, mért: C = 62,06%, H = 7,32%, O = 30,19%. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az A, B, D komponensekből és pleuromutilinből álló A-40 104 antibiotikum-keverék, az A- 40 104 A komponens, a 19,20-dihidro-A40 104 A, az A—40 104 A komponens és a 19,20-dihidro-A-40 104 A tetra-(2—6 szénatomos)-alkanoil-származékainak, az A-40 104 B komponens, a 19,20-dihidro-A-40 104 B, az A—40 104 B komponens és a 19,20-dihidro-A-40 104 B tri-(2—6 szénatomos)-alkanoil-származékainak, a pleuromutilin, továbbá az A-40 104 D antibiotikum előállítására, azzal jellemezve, hogy a Clitopilus pseudo-pinsitus NRRL 11 179 mikroorganizmust, vagy ennek egy A—40 140 antibiotikumot termelő mutánsát felhasználható szénforrást, nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmazó táptalajon, süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között tenyésztjük, majd elkülönítjük az A—40 104 antibiotikum-keveréket a táptalajból, és kívánt esetben elkülönítjük az A-40 104 A komponenst, az A-40 104 B komponenst, a pleuromutiljnt vagy az A—40 104 D komponenst az antibiotikum-keverékből, és kívánt esetben a 19,20-dihidro-A40 104 A, illetve a 19,20-dihidro-A-40 104 B előállítására hidrogé-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
