179464. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-40 104 jelű antibiotikum előállítására
3 179464 4 keznek, a vegyületek nemcsak Gram-pozitív, Gram-negatív festődésű és anaerob baktériumok ellen hatnak, de gátolják a Mycoplasma nembe tartozó mikroorganizmusokat is. Ily módon új antibiotikumokat találtunk a szárnyasok, sertések és szarvasmarhák mycoplasmás megbetegedéseinek és a Treponema hyodysenteliae okozta sertés dizentéria kezelésére. A találmány tárgya továbbá eljárás az A, B, D komponensekből és a pleuromutilinből álló A—40 104 antibiotikum-keverék előállítására, a találmány tárgya továbbá eljárás az A—40 104 A, az A—40 104 A 19,20-dihidro-származékának, az A-40 104 A tetra-(2—6 szénatomosj-alkanoil-származékainak és az utóbbiak 19,20-dihidro-származékának előállítására, a találmány tárgya továbbá eljárás az A—40 104 B, az A—40 104 B 19,20-dihidro-származékának, az A—40 104 B trí-(2—6 szénatomosj-alkanoil-származékainak és az utóbbi 19,20-dihidro-származékának előállítására, a találmány tárgya ezenkívül eljárás a pleuromutilin és az A—40 104 D komponens előállítására. A találmány értelmében a fentiekben felsorolt vegyületek előállítására a Clitopilus pseudo-pinsitus NRRL 11 179 vagy egy A-40 104 vegyületet termelő mikroorganizmust vagy mutánst felhasználható szénforrást, nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmazó táptalajon süllyesztett és levegőztetett fermentációs körülmények között addig tenyésztünk, míg jelentős mennyiségű antibiotikum halmozódik fel a táptalajban, ezt követően adott esetben az A—40 104 antibiotikum-keveréket elkülönítjük a táptalajból, majd adott esetben az antibiotikum-keverékből elkülönítjük az A—40 104 A komponenst, az A—40 104 D komponenst, a pleuromutilint vagy az A—40 104 D komponenst, majd adott esetben az A-40 104 A komponenst vagy az A—40 104 B komponenst hidrogénezzük, amiután 19,20-dihidro-A—40 104 A-t vagy 19,20-dihidro-A—40 104 B-t kapunk: majd adott esetben az A—40 104 A, 19,20-dihidro-A-40 104 A, A-40 104 B vagy a 19,20-dihidro- A40 104 B komponenseket acilezzük, amiután megkapjuk az A-40 104 A vagy a 19,20-dihidro-A-40 104 A komponensek tetran(2—6 szénatomos)-alkanoil-származékait, vagy az A—40 104 B vagy a 19.20- dihidro-A40 104 B komponensek tri-(2—6 széna tomosj-alkanoil-származékait. A találmány értelmében a fenti vegyületeket a Clitopilus pseudo-pinsitus NRRL 11 179 mikroorganizmus tenyésztésével állítjuk elő. A találmány antibiotikumok előállítására vonatkozik. Részletesebben, a találmány egy antíbiotikum-komplex, az A—40 104 antibiotikum-komplex előállítására vonatkozik, amely legalább 4 komponensből, az A, B, C és D komponensekből áll. Az előállítást Clitopilus pseudo-pinsitus NRRL 11 179 mikroorganizmussal végezzük. Az A-40 104 A és B komponensek új antibiotikumok. A találmány oltalmi köréhez tartoznak az A—40 104 A és B komponensek 19,20-dihidro-származékai, az A—40 104 A és B komponensek 2—6 szénatomos alkanoil-származékai, továbbá ezen származékok 19.20- dihidro-származékai is. Az A—40 104 A és B antibiotikumok szerkezetileg rokon vegyületek, ezek rokon vegyülete az A—40 104 C komponens is, amely az ismert pleuromutilin antibiotikummal azonos. A fermentáció során legalább 4 antibiotikum-komponens termelődik, ezek alkotják az A-40 104 antibiotikum-komplexet. A pleuromutilint és az A—40 104 A komponenst a szűrt fermentléből különítjük el előnyös extrakciós eljárással. Az A—40 104 B komponens úgynevezett minor komponens, kromatográfiás módszerekkel különíthető el és izolálható. A másik minor komponens az A—40 104 D kromatográfiával különíthető el, jellemzésre elegendő mennyiségben azonban még nem izoláltuk. A következőkben ismertetjük az A—40 104 A és B komponensek fizikai és fizikai-kémiai tulajdonságait. Az A—40 104 A komponens kloroformból kristályosítható, a kristályok 117 °C és 120 °C közötti hőmérsékleten olvadnak. Az A—40 104 A komponens tapasztalati képlete az elemanalízis alapján C27H42-09. Molekulasúlya a deszorpciós tömegspektrometriás mérés szerint 510. Az A—40 104 A antibiotikum trifluoretanolban vizsgált ultraibolya abszorpciós spektrumában a 284 nm-es hullámhosszon (e: 32) látható elnyelési maximum. Az A—40 104 A komponens trifluoretanolban vizsgált cirkuláris diszkroizmus spektrumában a következő maximumok láthatók: Ae: +2;84,200 nm-en, Ae: +1,72,295 nm-en. Az A-40 104 A komponens fajlagos forgatása: [a]^s : —14° (konc.: 1,0, etanol). Az A—40 104 A komponens 66%os vizes dimetilformamidban végzett elektrometrikus titrálása szerint a vegyületben titrálható csoport nincs. Az A—40 104 A komponens káliumbromidban vizsgált infravörös abszorpciós spektrumában a legjelentősebb elnyelési maximumok a következő frekvenciákon (cm-1) figyelhetők meg: 3590, 3500, 3450 (széles), 3280 (széles), 2990, 2980, 2960, 2940, 2920, 2890 , 2860, 1755, 1735, 1645, 1465, 1447, 1420, 1380, 1330, 1310, 1274, 1240, 1220, 1160, 1117, 1093, 1070,1060,1040,1014,984,955,940, 921, 905, 865, 760, 742, 698, 674, 603, 530 és 442. Az A—40 104 A komponens alkoholokban mint például metanolban és etanolban oldódik, részlegesen oldódik kloroformban, vízben oldhatatlan. Az A—40 104 A komponens fizikai és kémiai jellemzői alapján a pleuromutilin /3,D-xilo-piranozil-acetil-származékának látszik. A vegyület szerkezetét a III képletben adjuk meg. Az A—40 104 B komponens fehér színű amorf anyag, amely az A—40 104 antibiotikum-komplexben minor komponensként fordul elő. Az A—40 104 antibiotikum-komplex teljes aktivitásának 0,01% és 0,1% közötti részét képviseli. Elektron tömegspektrometriás mérés szerint az A—40 104 B komponens molekulasúlya 394. A molekula-ionok és egyes fragmens-ionok vizsgálata szerint az A—40 104 B tapasztalati képlete: C22H3406. A B komponens tömegspektrumban 318n/e-nél jelentkező csúcs (C20H30O3) azonos a pleuromutilin spektrumában 302 n/e-nél jelentkező csúccsal, ami azt jelenti, hogy a további oxigén-atom a B komponensben a vegyület magjában van, nem pedig az oldalláncban. A 164 n/e-nél jelentkező fragmens mind a B komponensben, mind a pleuromutilinben megtalálható. A 245 n/e-nél jelentkező kis csúcs (C17H25O) a pleuromutilin spektrumában 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
